张明超 郑春霞 黄 倩 马 怡 王伟伟 曾彩虹

免疫荧光检查是肾活检诊断必不可少的手段之一。然而，行免疫荧光检查的冰冻组织常无肾小球，如何弥补这一缺憾，文献有众多方法。我们采用高温高压联合酶修复法进行抗原修复，效果甚佳。

材料与方法

病例选择 选择在南京军区南京总医院全军肾脏病研究所住院经肾活检明确诊断的患者50例。狼疮疮肾炎(LN，2例Ⅳ型，2例Ⅳ +Ⅴ型)、抗肾小球基膜(GBM)肾炎、致密物沉积病、轻链沉积病(κ)及淀粉样变性(λ)各4例，感染后肾小球肾炎、膜性肾病及膜增生性肾小球肾炎各6例，IgA肾病12例。

方法 冰冻切片:冰冻组织切片(3μm)吹干，10%小牛血清封闭10 min，分别加DAKO公司异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔多克隆抗IgG(1∶200)、IgA(1∶100)、IgM(1∶50)、C3(1∶50)、C1q(1∶50)、κ(1∶100)、λ(1∶200)抗体，室温孵育 40 min，流水冲洗，吹干，甘油封片，荧光显微镜观察。

石蜡切片:肾活检组织经10%甲醛固定，切取1.5μm的切片，用防脱片剂(多聚赖氨酸)处理过的载玻片进行捞片，烤片。经二甲苯充分脱蜡，100%～75%梯度酒精至水，3%H2O2封闭内源性过氧化物酶10 min，将切片入EDTA缓冲液(pH8.0)，高温高压煮沸至喷气，保温2 min，自然冷却后水洗，加胃蛋白酶(Invitrogen公司)室温消化5 min，PBS洗，加10%小牛血清室温孵育10 min，加DAKO公司兔多克隆抗 IgG、IgA、IgM、C3、C1q、κ 及 λ 抗体，室温孵育2h，PBS洗，加FITC标记的猪抗兔IgG室温孵育30 min，水洗，吹干，甘油封片，荧光显微镜观察。

结果分析 采用免疫荧光半定量分析，按荧光强度0分:无荧光;0.5分:荧光很弱;1分:可见荧光;2分:较强荧光;3分:强荧光。

结 果

冰冻组织切片肾小球平均5个(3～8个)，石蜡组织切片肾小球14个(9～26个)。冰冻和石蜡组织切片染色的平均强度分析结果见表1。……