李 玲，曾庆坤，唐 艳

(中国农业科学院广西水牛研究所，广西南宁530001)

双抗体夹心酶联免疫法测定水牛初乳中的IGG

李 玲，曾庆坤*，唐 艳

(中国农业科学院广西水牛研究所，广西南宁530001)

为快速、准确地测定水牛初乳中IgG活性质量浓度，建立了双抗体夹心酶联免疫分析法(ELISA)。结果表明，IgG活性质量浓度的对数值与吸光值存在很好的线性关系，其标准曲线方程式为γ=-0.2907x2+2.0819x+0.8689，相关系数R2=0.9937，线性范围在7.8～1000ng/mL，平均回收率在84.40%～96.71%之间，灵敏度高、重现性好，可用于水牛初乳及其制品中IgG活性质量浓度的检测。

酶联免疫法，水牛初乳，IgG

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

亲和纯化牛IgG抗体、标准牛IgG、牛IgG-HRP (酶标二抗)等 均购自美国Fitzgerald公司;可溶型单组分TMB(四甲基联苯胺)底物溶液 购自天根生化科技(北京)公司;Tris碱 Sigma公司生产; Na2CO3、NaHCO3、NaCl、Tween-20、H2SO4均为分析纯。

酶联免疫检测仪 芬兰Labsystems NK3型;离心机 长沙湘仪L550型;八道可调式移液器，塑料离心管，96孔酶标板，微型振荡器，电子天平，精密pH计。

1.2 实验方法

1.2.1 溶液的配备 包被缓冲液:0.05mol/L Na2CO3及0.05mol/L NaHCO3，按照v/v=3∶7混匀后，用二者调pH至9.6，4℃冰箱中保存备用。

清洗液:0.05mol/L Tris-HCl 800mL，用盐酸调pH至8.0，加NaCl 8.1816g以及0.5mL Tween-20混匀，定容至1000mL，4℃冰箱中保存备用。

表1 ELISA法测定牛IgG的精密度

表3 麽拉水牛初乳中IgG质量浓度的变化

样品/标准样品稀释液:0.05mol/L Tris，0.14mol/L NaCl，0.05%Tween-20，pH 8.0，4℃冰箱中保存备用。

封闭液:0.05mol/L Tris，0.14mol/L NaCl，0.05% Tween-20，pH 8.0，4℃冰箱中保存备用。

底物液:TMB-H2O2溶液，即用型，使用前若呈蓝色则不可用，4℃冰箱中保存备用。

终止液:0.18mol/L H2SO4。

1.2.2 标准样品的配制 将24mg/mL的标准牛IgG进行稀释，得到质量浓度为0(空白)、7.8、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000、5000ng/mL的牛IgG标准样品。

1.2.3 样品预处理 取100mL水牛初乳，常温下4000r/min离心30min，除去上层的脂肪，用20%的盐酸调pH至4.6，静置20min后，常温下4000r/min离心20min，过滤，滤液用1mol/L的NaOH调pH至8.0，100mL容量瓶定容，用样品稀释液稀释一定倍数后待检。……