吴海波，江连洲，赵 英，刑常瑞

(1.东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨150030; 2.国家大豆工程技术研究中心，黑龙江哈尔滨150030)

发酵低温豆粕生产碱性蛋白酶的工艺研究

吴海波1，2，江连洲1，*，赵 英2，刑常瑞1

(1.东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨150030; 2.国家大豆工程技术研究中心，黑龙江哈尔滨150030)

以提油后的副产物——低温豆粕为培养基的主要成分，利用枯草芽孢杆菌为发酵剂发酵产酶，以碱性蛋白酶活力为考察指标，通过响应面法对培养基和发酵条件进行了优化。结果显示在发酵条件一定的前提下，当培养基组成为1.48%葡萄糖、0.57%豆粕、0.05%KH2PO4时，碱性蛋白酶有最高酶活1792±47.72294u/mL;以此为培养基，对发酵初始pH、温度、接种量三个条件进行优化，发现当pH8.9，接种量为4.9%，35.4℃时碱性蛋白酶活最高。此条件下进行三次平行实验，酶活为2401u/mL，比未优化前提高了37%，从而以低成本的原料，得到较高的经济效益。

枯草芽孢杆菌，碱性蛋白酶，响应面方法

1 材料与方法

1.1 材料与设备

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 购自于中国工业微生物菌种保藏中心;牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、酪氨酸、福林酚试剂、三氯乙酸、无水碳酸钠、氯化钠 均为分析纯;低温脱脂豆粕 哈尔滨高科生物技术公司;斜面保藏培养基蛋白胨1%、牛肉膏0.5%、氯化钠0.5%、琼脂1.5%，pH7.5，121℃灭菌20min;种子培养基 蛋白胨1%、牛肉膏 1%、氯化钠 0.5%，自然 pH，121℃灭菌20min。

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