楚金申，许 杨，何庆华，卢 江

(南昌大学食品科学与技术国家重点实验室中德联合研究院，江西南昌330047)

化学发光酶免疫法检测玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

楚金申，许 杨*，何庆华，卢 江

(南昌大学食品科学与技术国家重点实验室中德联合研究院，江西南昌330047)

应用抗脱氧镰刀菌烯醇单克隆抗体，以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，建立了一种简便、快速、高特异性的间接竞争化学发光酶免疫法用于检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇。所建立的方法分析灵敏度为10.7ng/mL，批内变异系数小于8.1%，批间变异系数小于12.8%，玉米的加标回收率为91.2%～99.5%，与其他常见真菌毒素未见明显交叉，所建立的标准曲线相关系数为0.9902，检测线性范围为12.9～163.7ng/mL，检测时间为40min。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，间接竞争化学发光酶免疫法(CLEIA)，检测

图1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的结构式

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体腹水、DON人工抗原(DON-HG-BSA) 实验室自制;脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)、伏马菌素 B1(Fumonisins B1，FB1)、伏马菌素B2(Fumonisins B2， FB2)、赭曲霉毒素 A(ochratoxin A，OTA)、黄曲霉毒素B1(Aflatoxins B1)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)、羊抗鼠IgG-HRP Sigma;辣根过氧化物酶(HRP)(RZ＞3) 上海生工;化学发光底物液Pierce公司(USA);检测DON的ELISA试剂盒 南昌博恒。

化学发光检测仪 Thermo公司(USA);96孔化学发光板条 购自深圳金灿华有限公司;酶标仪Thermo公司(USA)。

1.2 实验方法

1.2.1 间接竞争酶联免疫分析法(ELISA) 用0.05mol/mL磷酸缓冲液稀释抗原至1.5μg/mL，向微孔板中每孔加100μL，4℃包被12h，PBST洗涤液洗3次，每孔加300μL封闭液(5%的脱脂牛奶)，37℃封闭1h后，甩去封闭液洗涤3次，在吸水纸上拍干，每孔……