邢庆超，沐万孟，江 波，*，周榴明，储菲菲，张 涛

(1.江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122; 2.罗盖特美国公司，基奥卡克52632，美国)

D-阿洛酮糖的分离纯化

邢庆超1，沐万孟1，江 波1，*，周榴明2，储菲菲1，张 涛1

(1.江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122; 2.罗盖特美国公司，基奥卡克52632，美国)

通过生物法以D-果糖为原料生产D-阿洛酮糖，产物的分离纯化采用阴阳离子交换树脂脱色脱盐，再通过DTF-Ca2+型离子交换树脂进行分离纯化。最佳分离条件:柱温60℃，10mL进样量，1mL/min流速。通过高效液相色谱测定，分离得到的D-阿洛酮糖纯度为98.3%。

D-阿洛酮糖，分离，离子交换树脂，纯化

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

D-阿洛酮糖标样 Sigma公司;DTF-Ca2+色谱分离树脂、阳离子交换树脂001×7、阴离子交换树脂313 江苏苏青集团;其他试剂 均为分析纯。

Agilent 1200系列高效液相色谱 Agilent公司; Sugar-PakTM1糖柱 Waters公司;HL-2B型数显恒流泵、DBS-100自动部分收集器 上海沪西分析仪器厂。

1.2 实验方法

1.2.1 D-阿洛酮糖的生物酶法转化 根据报道，D-塔格糖-3-差向异构酶(D-tagatose-3-epimerase，DTE)家族可以催化D-果糖生成D-阿洛酮糖［6-7］，本实验室构建的CS-DTE酶，是DTE酶家族中的一种，可以应用于生物法生产D-阿洛酮糖。基本反应条件为:以1L酶反应器为例，含有700g/L的D-果糖，50mmol/L的Tris-HCl，100mmol/L的NaCl，10mmol/L的Co2+，pH8.0。该溶液500mL与发酵得到的含有CS-DTE酶的湿菌体充分混合，在60℃反应10h，得到D-阿洛酮糖和D-果糖的混合物。

1.2.2 D-阿洛酮糖粗样品处理 经过酶转化得到的D-阿洛酮糖和D-果糖的混合物，分批以8000r/min离心除去菌体，再经高温煮沸使溶液中酶蛋白变性沉淀，再次以12000r/min彻底离心除去溶液中蛋白质，获得混合的糖溶液。……