周华俊

念慈庵川贝枇杷膏由川贝、枇杷叶、沙参、茯神、橘红等十几味中药材提取制成的中成药，主要用于止咳化痰，降气平喘。有文献报道其部分药理学研究［1］。由于其药材的组成可能有免疫的功效，目前未见该方面的研究报道。笔者对此进行了研究，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，SPF级，购自中山大学实验动物中心，动物合格证号:粤检证字SCXK(粤)-2009-0070。

1.1.2 实验药物与试剂 念慈庵川贝枇杷膏为深圳东方力药业有限公司生产，批号:20091128;金水宝胶囊为金水宝胶囊由江西金水宝制药有限公司生产，批号:091107。环磷酰胺:上海华联制药有限公司生产，批号:20090821。实验前用0.9%氯化钠注射液配成浓度为5 mg/ml的溶液。印度墨汁:北京四中化工厂，批号900501，用时用0.9%氯化钠注射液稀释10倍。鸡红细胞悬液:无菌条件下鸡翼下静脉采血，放入相当于鸡血体积5倍的Alsever’s液，4℃保存。临用时用0.9%氯化钠注射液反复洗涤，离心3次，以恒定的血细胞比容数用0.9%氯化钠注射液配成5%鸡红细胞混悬液(Alsever’s液的制备:葡萄糖 2.05 g，柠檬酸钠 0.80 g，柠檬酸0.05 g，氯化钠0.42 g，重蒸馏水加至1.0 L，高压灭菌，4℃保存)。豚鼠血清:用心脏采血的方法取豚鼠全血，然后离心得到血清。其余试剂为分析纯试剂。

1.1.3 实验仪器 双光束紫外可见分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司，型号:TU-1901。

1.2 方法

1.2.1 炭粒廓清法［2］取昆明种小鼠，随机分为正常对照组、环磷酰胺造模组、受试药物低、中、高剂量组和阳性对照组，每组10只，然后各组小鼠按0.1 ml/10 g体重灌胃给药，1次/d，共7 d，其中正常对照组和环磷酰胺造模组给等体积蒸馏水。除正常对照组外，其余5组均于给药的第3～5天腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg，造成免疫功能低下模型。实验前小鼠禁食不禁水10 h，末次给药后1 h，各小鼠尾静脉注射印度墨汁0.1 ml/10 g体重，注射后第2 min(T1)、12 min(T2)分别从眼眶静脉取血20 μl，溶于2 ml的0.1%碳酸钠溶液中，摇匀，用双光束紫外可见分光光度计于680 nm波长处测OD值，最后将小鼠放血处死，取肝脾称其质量，计算廓清指数、校正廓清指数。

1.2.2 血清溶血素法 小鼠分组，给药同实验2.1在试验第1 d每鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.2 ml。末次给药后1 h，摘取动物眼球取血，3000r/min离心10 min，分离血清，用0.9%氯化钠注射液将血清稀释100倍。取稀释血清1 ml，与5%鸡红细胞悬液0.5 ml、10%豚鼠血清(补体)0.5 ml混匀，在37℃水浴温育30 min，然后置0℃冰箱中中止反应，将上述液体3000r/min离心10 min，取上清液，用双光束紫外可见分光光度计于540 nm处测定OD值，另设不加小鼠血清的空白对照管调零。以样品的OD值代表血清溶血素水平。

廓清指数K=(logA1-logA2)/(T2-T1)，式中A1、A2分别为第2 min、12 min的OD值。

1.3 2，4-二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应(DTH)试验 小鼠分组，给药同实验2.1随机分为免疫正常+DTH阳性组、Cy+DTH阴性组、Cy+DTH阳性组、Cy+DTH阳性+受试药物低剂量组、Cy+DTH阳性+受试药物中剂量组、Cy+DTH阳性+受试药物低剂量组、Cy+DTH阳性+金水宝组。实验前小鼠禁食不禁水10 h，然后各组小鼠按0.1 ml/10 g体重灌胃给药，1次/d，共7 d，其中免疫正常+DTH阳性组、Cy+DTH阴性组和Cy+DTH阳性组给予等体积蒸馏水。除免疫正常+DTH阳性组外，其余6组均于给药的第3～5天腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg，造成免疫功能低下模型。同时在第3天，除Cy+DTH阴性组以外，其他各组每鼠腹部去毛，将1%的2，4-二硝基氟苯丙酮液50 μl涂于脱毛处致敏，次日再强化一次。第7天各组小鼠用1%的2，4-二硝基氟苯液10 μl均匀涂于小鼠右耳进行攻击，攻击24 h后，处死小鼠，剪下左右耳，用直径9 mm打孔器打下相应的圆耳片，称重，并计算左右耳的耳肿差。

2 结果

2.1 炭粒廓清法 由表1可见:受试药物低、中、高剂量组校正廓清指数与环磷酰胺造模组比较，差异有统计学意义(P＜0.05，P ＜0.01)。

表1 受试药物对免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影响(±s)

表1 受试药物对免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影响(±s)

注:*与阴性对照组的比较P＜0.05;＊＊与阴性对照组比较P＜0.01

组别 动物数(只)给药剂量 廓清指数 校正廓清指数正常对照组 10 - 0.063±0.187＊＊ 8.357±2.143＊＊环磷酰胺造模组 10 - 0.042±0.011 5.826±1.143受试药物低剂量组 10 3.0 ml/kg 0.050±0.021 6.552±1.265*受试药物中剂量组 10 6.0 ml/kg 0.057±0.023＊＊ 7.150±1.163＊＊受试药物高剂量组 10 12.0 ml/kg 0.059±0.017＊＊ 7.163±1.277＊＊阳性对照药(金水宝胶囊)组 10 0.50 g/kg 0.061±0.012＊＊ 7.361±0.992＊＊

2.2 血清溶血素法由表2可见:受试药物中、高剂量组校正廓清指数与环磷酰胺造模组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 DTH试验 由表3可见:受试药物高剂量组校正廓清指数与DTH阳性造模组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表2 受试药物对免疫功能低下小鼠血清溶血素的影响(±s)

表2 受试药物对免疫功能低下小鼠血清溶血素的影响(±s)

注:*与阴性对照组的比较P＜0.05;＊＊与阴性对照组比较P＜0.01

组别 动物数(只) 给药剂量 血清溶血素水平(OD值)正常对照组 10 - 0.288±0.057＊＊环磷酰胺造模组 10 - 0.159±0.047受试药物低剂量组 10 3.0 ml/kg 0.196±0.054受试药物中剂量组 10 6.0 ml/kg 0.212±0.051*受试药物高剂量组 10 12.0 ml/kg 0.241±0.051*阳性对照药物(金水宝胶囊)组 10 0.50 g/kg 0.312±0.108＊＊

表3 受试药物对2.4-二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

3 讨论

通过实验可提示念慈庵川贝枇杷膏对碳粒廓清法，低剂量就表现出了良好的免疫效果，而在血清溶血素试验是中剂量，表现出了良好的免疫功能，DTH试验只有在较高剂量时，表现出一定的提高免疫功能。综上所述，念慈庵川贝枇杷膏对免疫低下小鼠具有一定的细胞免疫和体液免疫功能。

［1］ 晓龙，蒋伟哲，林自中.龙眼参提取物对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的影响.中国药房，2004，15(6):334.

［2］ 吴克明，曾婧，曾南，等.清宫止血颗粒对免疫低下小鼠免疫功能的影响.中西医结合学报，2004，2(3):203-204.