张冬梅,陈 萌,吴爱明,娄利霞,李丽娜,吕晞滢

活血益气方由黄芪、党参、丹参、川芎、赤芍等药物组成,是以活血益气法为指导思想而构建的经验方。大量研究显示,本方不仅在临床观察中防治心肌梗死后心力衰竭(心衰)有效,而且在多项动物实验研究中也证实有逆转心肌梗死后心室重构的作用[1,2]。促进梗死边缘区血管新生是活血益气方治疗缺血性心脏病的作用机制之一,其促血管新生作用可能与其诱导缺血心肌局部血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达有关[3]。VEGF165是 VEGF家族中发挥生物学效应的主要成分,是VEGF-A最丰富的异构体[4]。因此,为了进一步探讨活血益气方对缺血性心脏病治疗性血管生成的作用机制,我们通过构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,转染至人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中,构建HUVEC细胞VEGF信号通路激活细胞模型,离体观察活血益气方及其拆方药物血清对VEGF165基因转染脐静脉内皮细胞分泌一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的影响,以期部分揭示活血益气方作用的细胞学机制。

1 材料与方法

1.1 HUVEC-2 人脐静脉内皮细胞HUVEC-2(Cat No.200t-5n,Cell application)购自北京清源浩生物科技有限公司。

1.2 动物 成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重250 g～270 g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2009-0080。

1.3 仪器 超净工作台(北京半导体一厂),二氧化碳培养箱(Heraeus GBB16,德国),IMT-2倒置显微镜(OLYMPUS,日本),LDZ5-2低速自动平衡离心机(北京雷勃尔),HHW21-420电热恒温水浴箱(天津泰斯特),THZ-C恒温振荡器(北京太仓),PHS-3B精密PH计(上海雷磁),酶标仪(ClinicBio,美国)。GeneQuant紫外分光光度计(Pharmacia,美国),DYCZ-24DN型电泳仪、DYCZ-40D型电泳仪(北京六一厂)。……