应用反向线点杂交技术鉴定临床常见曲霉属和毛霉目真菌
2011-09-11赵作涛李丽丽王晓阳万喆陈伟李若瑜
中国真菌学杂志 2011年5期
赵作涛 李丽丽 王晓阳 万喆 陈伟 李若瑜
(北京大学第一医院皮肤性病科,北京大学真菌和真菌病研究中心,北京 100034)
近年来,随着广谱抗生素、抗肿瘤药物、糖皮质类固醇激素和免疫抑制剂在临床上的广泛应用,器官移植及导管技术的活跃开展,艾滋病和糖尿病的发病率的上升,免疫受损患者不断增多,曲霉属和毛霉目真菌感染的发病率呈急剧上升趋势,是免疫受损患者,特别是造血干细胞移植、器官移植及肿瘤放化疗患者的主要致死因素之一[1-2]。曲霉现已成为我国仅次于念珠菌的第二位条件致病性真菌,其感染死亡率高,如免疫受损患者发生侵袭性曲霉感染的病死率可高达90%;而毛霉目真菌的感染近年来也有不断增多趋势,特别在重症糖尿病和器官移植患者发生的急进性感染常可迅速危及患者生命[3-4]。曲霉属和毛霉目真菌的临床表现比较相似,但两者对不同抗真菌药物敏感性不尽相同,治疗与预后也不同。因此,正确鉴别真菌的种类是提高治愈率的关键。然而,传统的真菌病原体诊断方法存在耗时久、敏感性和特异性低的缺陷,远远不能满足临床早期特异诊断的需要。本研究使用靶向真菌的保守序列18S和28S rDNA区域的真菌通用引物,应用PCR方法进行扩增,再根据具有种特异性序列特征的ITS1区和ITS2区域设计具有种特异性的探针对PCR扩增产物进行反向线点杂交,拟鉴定曲霉属和毛霉目真菌至种的水平[5-6]。并与传统形态学鉴定方法、ITS区DNA测序方法鉴定结果比较,验证RLB方法的敏感性和特异性,拟为临床快速鉴定和早期诊断曲霉属和毛霉目真菌提供参考。……
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