邓洁 庄亮 陈元

肺癌是当今世界上对人类健康和生命危害最大的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）占所有肺癌病例85%以上[1]。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）是分子量为170 kDa的跨膜受体，在大多数上皮来源的肿瘤中表达增高，包括NSCLC[2]。放疗作为NSCLC的重要治疗手段，可直接或间接作用于DNA，其中DNA双链断裂（DNA double strand break, DSB）是最致命的[3]，但仍有一部分NSCLC对放疗不敏感。野生型EGFR可在放疗后1 h-4 h内入核，进行DNA损伤的修复而具有放疗保护的作用；而NSCLC突变型EGFR不能入核修复，对放疗相对敏感[3-5]。吉非替尼和厄洛替尼可抑制EGFR胞内端酪氨酸激酶，阻止下游信号传导，达到抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡[6]。本实验旨在研究吉非替尼对NSCLC细胞株H358是否有放疗增敏作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料 NCI-H358为人NSCLC细胞株，购自中国科学院细胞库，EGFR野生型，在基因水平上扩增，对吉非替尼敏感。主要试剂包括：吉非替尼（为阿斯利康公司赠予），称重研磨溶于DMSO，终浓度为10 mmol/L，分装后-20oC保存备用。EGFR（14C8）：sc-81450（Santa Cruz公司），Anti-phospho-Histone H2A.X（Ser139），clone JBW301 （Millipore公司），Lamin B1 polyclonal antibody （Biovision公司），TRITC-II抗（Invitrogen公司），HRP-II抗（Antgene公司），BCA蛋白浓度检测分析试剂盒（Thermo公司），细胞核浆蛋白分离提取试剂盒（Thermo公司），ECL化学发光试剂盒（GE Healthcare公司），Complete, EDTA-free protease inhibitor cocktail tablets（Roche公司）。主要仪器包括：医用直线加速器（瑞典ELEKTA-precise），激光共聚焦显微镜（日本Olympus公司），凝胶成像灰度定量分析系统（美国Bio-Rad公司）。

1.2 实验分组及照射方法 将H358细胞分为X线组和X线+吉非替尼组，前者进行单纯X线照射，后者为H358细胞在1 μg/mL吉非替尼作用24 h后进行再进行X线照射。H358细胞照射采用同济医院医用直线加速器机架角180度，源皮距100 cm，6 MV X线等中心照射，平皿、细胞培养瓶或24孔板下垫1 cm厚有机玻璃板。……