张帅 武雅琴 冯冬杰 张治 蒋峰 尹荣 许林

已有研究[1]证明肿瘤组织中存在一类具有干细胞样潜能的肿瘤发生细胞,它们可能是肿瘤发生、复发和耐药的关键,因而被称为肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs).当前,如何遏制CSCs的增殖潜能是肿瘤学领域的研究热点.新近研究[2]证明,CD133+非小细胞肺癌细胞具有自我更新能力,是肺癌干细胞(lung cancer stem cells, LCSCs)的表面标志之一.

微小RNA(microRNA, miRNA)是一类长度约22个核酸的非编码内源性小RNA,可以与基因mRNA的3'UTR区结合,起到在转录后水平调控基因表达的作用,已有研究[3]表明其在调控肿瘤分化、发生、浸润及转移等多个环节发挥重要作用,对未来肿瘤治疗可能产生革命性影响,因而受到广泛重视.我们基于临床肺腺癌组织标本,通过miRNA芯片初筛及qPCR验证发现:肿瘤较正常组织miR-145表达下调明显,提示其是一种潜在的"保护性"miRNA.生物信息学软件预测调控干细胞的关键基因OCT4是其可能的靶基因,本研究旨在阐明miR-145在调控LCSCs增殖中的作用及可能的分子机制.

1 材料与方法

1.1 试剂及细胞株 miRNA表达谱分析采用美国LC Science公司μParafloTMmicroRNA微流体微阵列芯片.miRNA提取试剂盒mirVana RNA Isolation Kit,逆转录试剂盒Taqman miRNA Reverse Transcripation Kit,荧光实时定量PCR试剂盒Taqman Universal PCR Master Mix No AmpErase UNG和内参RNU6B MGB探针标记的引物购于美国ABI公司.miR-145模拟物Pre-miR-145 mimics、阻遏物Anti-miR-145 inhibitor、miR-145模拟物阴性对照Pre-miR-145 mimics negative control和阻遏物阴性对照Anti-miR-145 inhibitor control购于美国ABI公司.转染试剂Lipofectamine 2000购于Invitrogen公司.肺腺癌A549及用于转染质粒载体的Hela细胞株购于中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库,RPMI1640培养基购于Hyclone公司,胎牛血清购于Gibco公司.OCT4、β-actin一抗购于Abcam公司,HRP标记的二抗购于北京中杉……