袁 征,徐文娟,彭 伟

血管内皮细胞的损伤及功能紊乱与高血压、冠心病及糖尿病等多种疾病的发生密切相关,其中,细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cellular adhesionmolecule-1,VCAM-1)和颗粒膜蛋白(PS)的含量变化与血管内皮细胞损伤密切相关[1]。本实验以AngⅡ建立血管内皮细胞损伤模型,以加味芎藭汤含药血清为干预因素,观察含药血清对血管内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1和PS含量的影响,为加味芎藭汤治疗与血管内皮损伤相关联的疾病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验药品 加味芎藭汤中之银杏叶、当归、酒大黄、川芎均由山东中医药大学附属医院中药房提供,并经山东中医药大学中药学院中药鉴定教研室鉴定为正品。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)由美国Sigma公司提供;卡托普利由山东潍坊制药厂提供,批号:10910005。

1.2 试剂 DMEM干粉培养、胎牛血清(FCS)、过氧化氢(H2O2)、胰蛋白酶,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(M TT),美国Gibco公司产品;二甲基亚砜(DMSO),天津市福辰化学试剂厂;酶联免疫吸附法ICAM-1与VCAM-1和PS测定试剂盒购自美国BPB生物医学有限公司。

1.3 仪器 水套式二氧化碳孵箱,美国Nuaire公司产品;倒置相差显微镜,全自动生化分析仪:AU1000型,日本OLYMPUS公司产品;超净工作台,苏州净化设备公司产品;酶联免疫检测仪,华东电子管厂产品;LX808动力学定量绘图酶标仪,美国宝特原装进口产品。实验用细胞人脐静脉内皮细胞系(ECV-304),购自山东省医学科学院,由美国组织培养库ATTCCCRI-1998引进)。

1.4 含药血清制备 雄性Wiatar大鼠10只,加味芎藭汤按13.3 g/(kg◦d)灌胃给药,连续7 d,于末次给药2 h后,麻醉,取血,无菌分离血清,经56℃、30 min灭活后,配置含药血清培养液备用。……