蒋国华,廖维甲,覃理灵,梅铭惠,陈 谦,袁晟光,刘 杰

(1.桂林市卫生学校,广西桂林 541002;2.桂林医学院附属医院,广西桂林 541001）

AFP诊断HCC是目前公认的肿瘤标志物,但阳性率仅为70%左右,假阴性率达30%,且AFP水平高低与肿瘤大小有关,不利于HCC的早期诊断和小肝癌的发现,尤其是术后复发的预测。HCC根治切除术后3年和5年的复发率分别高达50%和70%[1],需要寻找更加敏感的早期诊断和术后复发监测指标。近年发现磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC-3）与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关,它是一种细胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白,基因位于人染色体X26.10,由8个外显子组成,启动子区有多个转录因子结合位点[2],国内学者对GPC3研究不多,国外学者对GPC-3在HCC的发生和发展提出了一些假说。本文采用RT-PCR方法对HCC癌组织及癌旁组织测定GPC-3 mRNA的表达水平。

1 材料与方法

1.1 标本60例HCC癌组织及其癌旁组织取自本院肝胆外科HCC手术切除的肝脏组织。男52例,女性8例,平均年龄49岁;肿瘤直径＜5 cm 13例,5 cm＜肿瘤直径＜10 cm 28例,＞10 cm或伴有肝内外转移19例;肿瘤数目单个47例,2个或2个以上13例;肿瘤有完整包膜24例,无包膜或包膜不完整36例;11例有镜下门静脉癌栓,血清AFP阳性41例,HBsAg阳性56例。所有的组织标本均经术后病理检查证实。60例癌旁组织病理诊断:18例慢性肝炎,36例肝硬化,6例正常组织。标本经手术切除后立即分装放入液氮保存。

1.2 试剂和仪器RNA提取试剂盒Trizol(Invitrogn公司）,maker、RT-PCR试剂盒(宝生物工程(大连）有限公司）,紫外分光光度计和RT-PCR仪(BIO公司）。

1.3 引物设计与合成根据GenBank的相应cDNA序列,运用Premier 5.0软件设计GPC-3和β-Actin引物序列,并经Pubmed Blast对比分析,均具有较好的特异性,由上海生物工程公司合成。……