刘红敏,陈旭东,华新宇

(漯河医学高等专科学校组织胚胎学教研室,河南漯河 462002）

近年来虽然胚胎干细胞、神经干细胞、骨髓基质细胞治疗神经系统病变已取了成绩,但胚胎干细胞和神经干细胞取材难,且有伦理方面和移植后易形成瘤的困扰,而骨髓基质细胞要跨胚层分化且取材时对机体损伤大,对神经系统疾病的临床治疗也不尽人意。近年来研究证明人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs）具有部分胚胎干细胞特性[1-2],可分化为3个胚层不同类型的细胞[3-6],诱导剂和方法被认为是关键因素。本实验比较了两种化学诱导剂诱导人羊膜细胞向神经细胞方向分化的情况,以寻求一种较为理想的诱导剂及方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

MEM培养基购自(美国Gibico公司）;人羊膜上皮细胞WISH细胞株购于中国科学院上海生命科学研究所;小鼠抗人NSE、GFAP单克隆抗体、兔抗鼠SP-Kit检测试剂盒、DAB显色试剂盒(棕黄色）均购于北京中杉金桥生物工程公司;胎牛血清(购自杭州四季青生物工程材料有限公司）;碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF）、全反式维甲酸(alltransretinoic acid,ATRA）、丁酸羟基茴香醚(butyl hydroxy anisd,BHA）、胰酶购于sigma公司。

1.2 实验方法

1.2.1 预诱导液和诱导液的配制 以含10%胎牛血清和10 μ g/L碱性成纤维细胞生长因子的MEM培养基作为预诱导液;以含1 μ mol/L全反式维甲酸和无血清的的MEM培养基作为一种诱导液;以200 μ mol/L丁酸羟基茴香醚和无血清的MEM培养基作为另一种诱导液。

1.2.2 细胞的准备 人羊膜WISH细胞悬于10%胎牛血清的MEM 培养基,按2×104个/ml接种于25 ml培养瓶中,置37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养。……