尹文东,于 庭,梁 艳,阳幼荣,肖 漓,王 兰,王 莹,史迎昌,张俊仙,吴雪琼*

(1.吉林大学第二医院,吉林长春 130041;2.中国人民解放军309医院全军结核病研究所北京 100091）

结核病是一种非常古老且迄今为止仍然严重影响人类健康的呼吸道传染病。具有近百年历史的卡介苗,由于其亚系的变异性和有限的保护作用,在应用中备受争议[1]。母牛分枝杆菌菌苗(Mycobacterium Vaccae,MV）具有与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB）相似的抗原[2],富含介导保护性免疫反应的抗原,缺少介导变态反应的抗原,是一种良好的双向免疫治疗制剂[3]。Ag85复合物(主要由Ag85A、Ag85B和Ag85C组成）是MTB分泌的重要蛋白,具有分枝菌酸转移酶(Mycolyl-transferase）活性,在细胞壁的合成阶段发挥重要作用[4]。该复合物可以激发较强的细胞免疫,这对于以细胞免疫为主的机体抗结核反应具有重要意义。本研究将结核分枝杆菌rAg85A和/或rAg85B蛋白与MV联合免疫小鼠,通过动物实验观察两种蛋白的免疫效果,以期研发现有结核病治疗性疫苗的增强剂。

1 材料与方法

1.1 实验动物17-20 g、SPF级6-8周龄雌性BALB/c小鼠60只,购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心。

1.2 主要试剂及其来源rAg85A、rAg85B蛋白由解放军309医院全军结核病研究所克隆、表达、纯化;冻干皮内注射用卡介苗购自成都生物制品研究所;冻干注射用母牛分枝杆菌菌苗(22.5 μ g/支）购自安徽龙科马生物制药有限责任公司;辣根过氧化物酶(HRP）标记的山羊抗鼠 IgG、IgG1和 IgG2a购自Southern Biotech;小鼠 ELISPOT试剂盒、Fluorescein Isothiocyanate(FITC）标记的抗鼠 IFN-γ、Phycoerythrin(PE）标记的抗鼠白介素-4(IL-4）、CD3-Percp、CD8-APC、溶血剂、破膜剂和γ 2a/γ同型对照购自美国BD公司。

1.3 动物分组……