曾昭伟,王学谦

(1.天津医科大学研究生院,天津 300070;2.天津市天津医院 检验科,天津 300211）

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO）是一种促进红系造血前体细胞分化、繁殖的细胞因子,相对分子量为32-39KD,在调节人体循环红细胞,维持一定浓度中有重要作用。EPO释放增加导致红细胞增多,释放减少则导致红细胞减少,它和多种疾病相关[1,2]。EPO缺乏最常见的原因是慢性肾衰。而生成过度常见于组织缺氧、血红蛋白血症。

EPO含量的高低在某些疾病的诊断中,是重要的检测项目。现在,ELISA方法由于简便快捷、成本低,灵敏度、特异度均较高等优点,成为研究的重要方向。

由于抗EPO抗体可测定有免疫活性的EPO,制备抗体及酶标抗体在ELISA检测体系中具有重要应用价值。本研究从来源充足、纯度较高的rhEPO入手,免疫动物制备多克隆抗体,并标记酶标抗体,为进一步建立EPO相关试剂盒做好准备。

1 材料与方法

1.1 材料(1）主要试剂:rhEPO购自华北金坦生物技术股份有限公司;pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS）;胎牛血清来自天津沃克生物科技公司;BSA购自天津北方天医化学试剂厂;醋酸钠、高碘酸钠、硼氢化钠均购自天津北方天医化学试剂厂;弗氏佐剂购自sigma公司。(2）主要仪器:电泳仪购自北京六一仪器厂;PH计、AL104电子天平均购自天津市天马仪器厂;磁力搅拌器购自天津市华北实验仪器有限公司;HD-A电脑采集器及HD-3紫外检测仪均购自上海沪西分析仪器有限公司;微孔滤膜购自Whatman;透析袋购自 specteum;辣根过氧化物酶(HRP）购自GE公司。

1.2 方法

1.2.1 抗原的纯化 纯化rhEPO,凝胶在平衡液中充分溶胀处理。……