郑燕璇 王晓鸿 孟晓军

冰冻切片免疫荧光细胞技术的改良

郑燕璇 王晓鸿 孟晓军

由于免疫荧光细胞化学的特异性、快速性和在细胞水平定位的敏感性与准确性，已在病理学诊断方面得到广泛应用。本文就我科多年的荧光技术实际操作中的经验体会做个介绍。

冰冻切片;免疫荧光细胞化学;免疫荧光细胞化学技术

免疫荧光细胞化学技术［1］是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，由于其特异性、快速性及准确性，在病理学诊断方面已得到广泛应用，其中以直接法更为简便、快速。现就我们科多年来在肾穿、皮肤组织免疫荧光操作中的体会做个总结。

1 资料与方法

1.1 材料 肾穿、皮肤组织冰冻切片数张荧光抗体

1.2 方法［2］①将肾穿、皮肤标本置于恒温冷冻机的冷冻头上，加少许OCT包埋剂，于冷室内－25℃冷冻切片，厚度要求3～4 um，根据所备抗体切出相应数量的片子［3］;②用冷风机将切片吹干;③将pH7.4的PBS液平铺于切片上，浸泡2 min;④将稀释好的荧光抗体滴于切片上，在37℃温箱内孵育8～10 min;⑤甩去切片上的荧光抗体，用pH7.4的PBS液平铺浸泡切片2 min;⑥用纸巾擦去组织周边的液体，滴加缓冲甘油封片。

2 结果

根据显现的荧光强度来判断免疫复合物的多少，其观察结果［4］分为6级:镜下未见免疫复合物荧光:-;高倍下隐约可见:±;低倍镜下隐约可见、高倍镜下可见:+;低倍镜下可见、高倍镜清晰可见:++;低倍镜下清晰可见，高倍镜下耀眼:+++;低倍镜下耀眼，高倍镜下刺眼:++++。

3 讨论

免疫荧光细胞化学［5］是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。……