方芳 达世俭 湛达河 刘超愿 刘佳丽

临床上，宫颈癌是女性生殖系统最常见恶性肿瘤之一，全世界范围内发病率呈不断上升趋势[1]。人附睾分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4，HE4)是一种新型的妇科肿瘤标志物，主要分布于生殖系统上皮，如附睾、精曲小管、输精管上皮、输卵管上皮及子宫内膜等，HE4对卵巢癌、宫颈癌及子宫内膜癌等妇科恶性肿瘤的早期诊断和监测具有重要价值[2]。本研究通过对比宫颈癌、子宫良性肿瘤患者及正常健康女性血清HE4表达水平差异，探讨血清HE4表达水平鉴别诊断宫颈良恶性肿瘤的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料自2008年1月至2011年5月，对我院住院手术的患者，根据术后石蜡切片病理报告，将患者分为宫颈癌组30例、宫颈良性肿瘤组30例，并选择同期行体检的健康女性30例作为对照组。

1.2 标本采集及处理宫颈癌、宫颈良性肿瘤组患者于手术前，对照组妇女于体检时，均空腹抽取肘静脉血3～5 ml，室温下静置30 min，3000 r/min离心15 min，取上层血清分装于聚丙烯EP管内，储存于-80℃。

1.3 血清HE4的检测方法实验前2 d将待测血清标本从-80℃冰中取出，放置于4℃冰箱中缓融。检测时室温保持在20℃～25℃，检测前将试剂和血清标本平衡至室温，并将试剂和标本充分混匀。具体方法如下:清洗微孔板条1次，将HE4标准品、质控品及待测标本各25分别加入微孔中，每孔中加

入100 μl生物素标记的HE4抗体，置微孔板振荡器上室温孵育1 h。弃掉孔内液体，充分清洗3次。每孔中加入100 μl示踪工作液，置微孔板振荡器上室温孵育1 h。弃掉孔内液体，充分清洗6次。每孔中加入100 μl辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺(HRP-TMB)底物液，加液应尽可能快速，置微孔板振荡器上室温、避光孵育30 min。加入100 μl止液，混匀，立即在酶标仪上于405 nm处测定吸光度值。采用二项式拟合曲线法绘制标准曲线，质控品复孔检测结果的平均值在试剂瓶标示值范围内认为血清HE4检测结果有效，行重复实验验证结果的可靠性。血清HE4正常阈值为为0～150 pmol/L[3]。

1.4 统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计学处理，计量资料采用秩和检验，计数资料采用χ2检验。血清HE4水平以中位值表示，以病理诊断为金标准。制作受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线，ROC曲线最左上方的点即约登指数(Yonden index)最大的点的测定值，计算曲线下面积(area under the curve，AUC)、敏感度和特异度，以反映诊断的准确性。

2 结果

2.1 血清HE4水平差异比较宫颈良性肿瘤组和正常健康对照组血清HE4中位值均在正常范围内，两组差异无统计学意义(P＞0.05);宫颈癌组患者血清HE4中位值明显高于正常值，与宫颈良性肿瘤组和正常健康对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。宫颈癌组患者血清HE4阳性率为80.0%，显著高于子宫良性肿瘤组和正常健康对照组阳性率(均P＜0.05)。见表1。

表1 各组血清HE4中位值和阳性率(%)

2.2 血清HE4水平对宫颈癌的诊断效能ROC曲线分析结果表明，以宫颈良性肿瘤组+正常健康对照组为参照人群，血清HE4表达水平在114.8 pmol/L时诊断宫颈癌的Youden指数最大为0.657，AUC为0.827，其敏感度和特异度分别为73.1%和83.4%。见图1。

图1 血清HE4诊断宫颈癌的ROC曲线

3 讨论

血清HE4是一种小分子分泌型糖蛋白，是近年发现的一个肿瘤标志物，对卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌的早期诊断和监测具有重要价值[4]。HE4基因最早在人附睾上皮细胞中被发现，它定位于染色体20q12～q13.1上，全长约11.78 kb，编码124个氨基酸的HE4蛋白前体，其编码的蛋白质被认为是附睾特有的、与精子成熟有关的蛋白质[5]。国外学者采用PCR反应、Norihem印迹杂交、免疫组化、基因芯片和组织芯片等方法对HE4蛋白进行了组织定位，发现其主要分布于生殖系统上皮，如附睾、曲细精管、输精管上皮、输卵管上皮和子宫内膜上皮等[5];此外，在其他一些组织的导管和腺上皮也有表达，其中支气管和腮腺表达较高，乳腺导管、甲状腺、肾远曲小管、前列腺、结肠黏膜部分阳性[6]。

本研究通过评价了宫颈癌患者、宫颈良性肿瘤患者和正常女性的血清HE4中位表达水平和阳性率差异，并采用ROC曲线探讨了血清HE4诊断宫颈癌的效能。研究结果表明，宫颈癌组患者血清HE4中位值明显高于宫颈良性肿瘤组和正常健康对照组，其血清HE4阳性率高达80.0%，亦显著高于子宫良性肿瘤组和正常健康对照组阳性率。此外，本研究以宫颈良性肿瘤组+正常健康对照组作为参照人群，应用ROC曲线评价了血清HE4诊断宫颈癌的效能，结果表明血清HE4表达水平在114.8 pmol/L时诊断宫颈癌的Youden指数最大可达0.657，AUC为0.827，其敏感度和特异度分别为高达73.1%和83.4%。

综述所述，我们可以得到以下初步结论:血清HE4表达水平是鉴别诊断宫颈良恶性肿瘤的有效工具，其敏感度和特异度相对较高，可有助于临床早期诊断宫颈癌。由于本研究入组病例较少、血清HE4检测方法局限性、数据描述等方面存在的欠缺，以上结论尚需更多大样本临床研究加以证实。

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