肖开银 彭民浩 秦权林 桂文波 覃 晓 彭 涛 郭 雅 陈 滨 卢景宁 黎乐群

肝细胞癌(以下简称肝癌)是常见的肝脏恶性肿瘤，肝癌的发生是染色体不稳定性和畸变遗传积累的结果，肝癌染色体异常在癌前期即可出现，表现为超倍体。由于肝癌细胞培养技术复杂和染色体核型复杂，很难获得肝癌细胞的染色体中期分裂相，因此，传统的染色体显带技术及核型分析很难准确检测到肝癌细胞染色体异常。比较基因组杂交(CGH)技术采用基因组竞争性杂交技术，不受染色体断裂和细胞分裂相的影响，能准确检测肝癌细胞染色体的非平衡性异常，我们采用比较基因组杂交技术检测25例肝癌患者癌细胞染色体失衡情况，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 临床资料

收集我院手术切除的肝癌患者25例，术后病理均诊断为肝细胞癌，其中男23例，女2例，年龄23～65岁，中位年龄41岁。HBsAg阳性25例，AFP阳性21例，肿瘤平均(7.2±4.9)cm，合并肝硬化18例，合并癌栓9例，所有病例术前均未接受化疗或(和)放疗。

1.2 主要试剂和仪器

所有CGH试剂盒、男性健康人外周血淋巴细胞标准中期分裂相染色体和对照DNA(标记红色荧光SpectrumRed-dUTP)均购自美国Vysis公司，激光共聚焦显微镜、CCD冷光源、CGH分析软件均购自美国Apply Image公司。

1.3 实验方法

1.3.1 基因组DNA抽提 采用苯酚-氯仿-蛋白酶K方法提取基因组DNA。

1.3.2 CGH技术 用Nick Pranslation(DNA缺口平移法)制备肿瘤DNA探针，标记上绿色荧光 SpectrumGreen-dUTP，按试剂盒说明书操作，将肿瘤DNA、对照DNA和Cot-1DNA3种探针混合杂交于中期分裂相染色体，37℃避光孵育72h，洗片、封片后在激光共聚焦显微镜下观察染色体荧光分布。……