(北京世纪坛医院，北京 100038)

单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是趋化因子家族中的主要成员之一，在肿瘤、炎症、糖尿病视网膜病变等新生血管性疾病中，MCP-1起着重要的作用。它与血管内皮生长因子(VEGF)共同参与新生血管的形成［1］，VEGF 可通过激活核因子(NF)-κB、活化蛋白(AP)-1而诱导血管内皮细胞表达MCP-1［2］，而MCP-1可以作用于血管内皮细胞膜上的高亲和受体CCR2，与G蛋白结合，趋化内皮细胞定向运动;同时MCP-1可趋化肿瘤相关巨噬细胞(TAM)进入组织，分泌VEGF等，间接刺激肿瘤新生血管生成。而许多致盲性视网膜疾病都与新生血管的产生有关。2010年6～7月，我们观察了新生小鼠视网膜发育过程中MCP-1的表达，探讨其在血管形成过程中的作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 C57BL/6J幼鼠(3、5、7、12、14、21日龄小鼠各10只)60只，雌雄不限，均为无特定病原体级(SPF级)，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。

1.2 实验方法 将所有小鼠按日龄(3、5、7、12、14、21日)分别处死。立即摘除眼球，冰上分离视网膜，分别采用RT-PCR和Western blot法、免疫组化染色检测MCP-1 mRNA和蛋白。①RT-PCR检测:取部分视网膜组织，用Trizol试剂提取总RNA，RNA定量后参照文献［3］的方法，用一步法 PCR试剂盒。MCP-1上游引物:5'-CTGGACCCAACTGCAACTGCTT-3'，MCP-1 下游引物:5'-ACTGGCCTTCGGTTTCCTTATC-3'，扩增片段 544 bp;β-actin 上游引物:5'-TCATGAAGTGTGACGTTGACATCCGT-3'，β-actin 下游引物:5'-TCCAGAAGCATTTGCGGTGCACGATG-3'，扩增片段316 bp。合成 cDNA，PCR扩增过程:55℃、30 min，预变性94℃、2 min，变性94 ℃、15 s，退火57 ℃、30 s，延伸72 ℃、1 min，后延伸72℃、10 min，共35个循环。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，用图像分析仪进行图像分析。所得结果与β-actin的比值为MCP-1 mRNA相对表达量。每样品实验重复3次，取均值。②Western blot检测:取部分视网膜组织，提取总蛋白，参照文献［3］，将定影后的X线胶片用JVCKy-F30B图像摄录输入仪扫描，KONTRONIBAS2.0全自动图像分析系统(德国Koutron公司)进行半定量分析。……