人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制探讨
2011-07-31
(1山东省立医院,济南 250021;2山东大学医学院)
目前对乳腺癌的治疗主要采用手术、化放疗等综合治疗。传统化疗药物多存在选择性差、毒性作用大、易发生耐药等问题。研究开发新的化疗辅助药物对于提高疗效,减轻患者痛苦具有重要意义。人参作为我国传统的名贵中药材,具有多种生物活性。已证实多种人参皂苷单体如Rh、Rg等均具有抗肿瘤作用,但其确切机制尚未明了。2010年1月~2011年1月,我们观察了人参皂苷Rg3对雌激素受体(ER)阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响。现报告如下并探讨其可能机制。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 人参皂苷Rg3(中国药品生物制品检定所),甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(Santa Cruz,USA),辣根过氧化物酶(HPR)标记二抗(北京中衫金桥生物技术有限公司),DMEM培养基(GIBCO,USA),胎牛血清(杭州四季青生物工程公司)。超敏化学发光(ECL)试剂盒(Amersham Biosciences,USA)、二喹啉甲酸(BCA)蛋白质定量试剂盒(碧云天生物技术有限公司)。
1.2 人参皂苷Rg3溶液制备及细胞培养 人参皂苷Rg3干粉用二甲亚砜(DMSO)溶解为100 mg/ml,备用;MDA-MB-231购自上海细胞所,细胞培养于含10%胎牛血清、青霉素100 U/ml、链霉素100 U/ml的DMEM培养基中,37℃恒温培养,生长至80%~90%融合后传代,隔天换液1次。
1.3 细胞分组及细胞活力检测 取对数生长期的MDA-MB-231,按2 000/孔的密度接种于96孔板,培养24 h后加药。每组设4个复孔,分别加入终浓度为50、100、200、400、600 μmol/L 人参皂苷 Rg3(为实验组),设不加药物的细胞为对照组。采用MTT法测算两组细胞存活率。两组分别于孵育24、48、72 h后每孔加MTT(5 g/L)20 μl,继续孵育4 h后弃培养液,加入DMSO 150 μl/孔混匀,酶标仪(波长570 nm)测定各孔OD值。细胞存活率=实验组OD值/对照组OD值×100%。……
