秦书德，马晓伟，陈 静，郭兴杰

苯磺酸氨氯地平是目前临床应用广泛的一线抗高血压药物。国家药品标准中已对苯磺酸氨氯地平片的含量均匀度以及溶出度作出了相关质量规范，但无有关物质检查标准[1]。笔者建立了苯磺酸氨氯地平片有关物质检查方法，并利用该方法对5个厂家生产的市售苯磺酸氨氯地平片进行了检查，现将结果报道如下。

1 仪器与试药

LC－10A型高效液相色谱仪，配备SPD－10A型紫外可见光检测器、Solution色谱工作站(日本岛津公司);BS110S型电子天平(德国Sartorius公司);As3120B型超声波清洗器(天津奥特赛恩司仪器有限公司);HHS 21－4型电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。苯磺酸氨氯地平对照品(中国药品生物制品检定所);苯磺酸氨氯地平片(共5个厂家产品，批号分别为20100122，20100106，20100215，20100129，20100301);甲醇、水以及其他试剂均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇－30 mmol/L磷酸二氢钾溶液(60∶40);流速:1.0 mL/min;检测波长:238 nm;柱温:室温;进样量:20μL。在上述色谱条件下，氨氯地平峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5，理论板数按氨氯地平计算大于1 000。苯磺酸氨氯地平对照溶液连续进样6次，峰面积的RSD为1.0%。

2.2 溶液制备

图1 破坏性试验高效液相色谱图

图2 高效液相色谱图

取本品10片，研细，精密称取片剂粉末适量(约相当于氨氯地平5 mg)，置25 mL量瓶中，用适量流动相溶解，超声处理30 min，放冷至室温，用流动相稀释至刻度，滤过，得到氨氯地平质量浓度为200μg/mL的供试品溶液。取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为2μg/mL的对照溶液。

2.3 专属性试验

2.3.1 空白试验

按照处方比例配制空白辅料溶液，取此溶液20μL进样，记录色谱图。结果表明，空白辅料对测定无干扰(图1 A)。

2.3.2 破坏性试验

酸、碱破坏:分别取片剂粉末适量(约相当于氨氯地平1 mg)，置10 mL试管中。酸破坏条件为0.1 mol/L的盐酸溶液，100℃水浴加热20 min。碱破坏条件为0.1 mol/L氢氧化钠溶液，100℃水浴加热20 min。再分别用相应浓度的碱或酸中和破坏溶液，流动相定容至5 mL，滤过，作为供试品溶液。色谱图见图1 B和图1 C。

光照破坏:取片剂粉末，用水配制成质量浓度约为200μg/mL的氨氯地平溶液，于自然光下光照96 h，滤过，作为供试品溶液。色谱图见图1 D。

氧化破坏:取片剂粉末，置10 mL试管中，加入3%过氧化氢0.5 mL，100℃水浴 20 min，用流动相定容至 5 mL，摇匀，得质量浓度为200μg/mL的氨氯地平氧化破坏溶液，滤过，作为供试品溶液。色谱图见图1 E。

高温破坏:取片剂粉末，在100℃下加热1 h(样品粉末微黄，略黏附于管壁)，精密称取适量，用流动相溶解制成氨氯地平质量浓度约为200μg/mL的溶液，滤过，作为供试品溶液。色谱图见图1 F。

2.4 方法学考察

线性关系考察:精密称取苯磺酸氨氯地平对照品适量，用流动相溶解并稀释制成氨氯地平质量浓度为7.10μg/mL的溶液。精密量取上述溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置 10 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得到氨氯地平系列对照品溶液。取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积。以峰面积(A)为纵坐标、质量浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程 A=28 169 C+1968，r=0.9997(n=5)。结果表明，氨氯地平溶液质量浓度在0.71 ～3.57μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

检测限确定:取氨氯地平系列对照品溶液，逐级稀释，注入液相色谱仪，当信噪比为3时，测得氨氯地平的最低检测限为0.4 ng;当信噪比为10时，测得氨氯地平的定量限为1.7 ng。

稳定性试验:将对照品溶液在室温下避光放置，分别于0，2，4，6，8 h时进样，测得峰面积的 RSD为1.4%(n=5)。结果表明，溶液在室温下避光放置8 h稳定。

重复性试验:取批号为20100129的片剂，按2.2项下方法平行制备6份供试品溶液，依法测定，计算有关物质含量。结果的RSD为1.8%(n=6)，表明方法重复性良好。

2.5 有关物质检查

取本品10片，研细，用流动相制成每1 mL中约含200μg氨氯地平的溶液，作为供试品溶液;精密量取适量，用流动相制成每1 mL中含2μg氨氯地平的溶液，作为对照溶液。精密量取对照溶液20μL，注入液相色谱仪，调节仪器检测灵敏度，使主成分的峰高约为满量程的10% ～20%;再精密量取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰峰面积之和不得大于对照品溶液主峰面积。按有关物质检查方法对市售5个厂家生产的苯磺酸氨氯地平片进行了检查，有关物质含量分别为0.08%，0.79%，0.27%，0.61%，0.21%，均符合规定。批号为20100106的片剂的有关物质检查色谱图见图2。

3 讨论

以高效液相色谱法为分离手段，光电二极管阵列检测器为检测手段，考察苯磺酸氨氯地平的紫外吸收特性。结果表明，在200～400 nm波长范围内，苯磺酸氨氯地平在208，238，360 nm波长处有最大吸收值。360 nm波长处的吸收值较小，灵敏度较低，不适合作为有关物质的检测波长;208 nm波长靠近紫外吸收末端，试验中空白辅料在此波长下有干扰。故选择238 nm作为检测波长。专属性试验结果表明，在建立的色谱条件下，氨氯地平可与各破坏试验产生的降解产物和样品中的相关杂质得到良好分离，方法专属性良好。

在本研究中，采用不加校正因子的主成分自身对照法进行有关物质检查，可以比较直观地反映有关物质含量，符合药典规定。《化学药物杂质研究的技术指导原则》规定，最大日剂量为10～100 mg的药物制剂，其杂质的质控限度可定为0.5%或200μg(取最小值)。根据测定结果，5个厂家苯磺酸氨氯地平片的有关物质含量最高为0.79%，考虑到实际生产情况，在进行苯磺酸氨氯地平片的质量研究时，将有关物质检查的限度定为1.0%。

[1]WS1－ (X －010)－2001Z，卫生部颁药品标准[S].