王永忠，严 桐，朱 珍，叶春艳，周胜生，芮冬妹，申红玉，柳龙根

(常州市第三人民医院，江苏常州213001)

聚乙二醇干扰素(PEG-IFN-α)联合利巴韦林(RBV)是目前治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的标准模式。最新研究表明，白细胞介素28B(IL-28B)基因多态性与PEG-IFN-α和RBV联合治疗效果具有较高的相关性［1～3］。我们对42例接受PEG-IFN-α和RBV联合治疗的慢性丙型肝炎患者IL-28B基因区rs12980275、rs12979860、rs8099917的多态性进行了检测分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2009年1月～2011年3月我院收治的42例慢性丙型肝炎患者，均接受180 μg/周PEG-IFN-α联合RBV治疗，诊断及疗效判断标准参照2000年全国传染病与寄生虫病学会和肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案中的标准。其中，男24例、女18例，年龄18～73岁、平均42.5岁;有输血史33例，吸毒史4例;基因型1b型39例，2a型1例，3b型2例。

1.2 方法

1.2.1 引物及探针序列 IL-28B基因多态性检测试剂盒由上海翼和应用生物技术有限公司提供。引物及探针序列见表1。

1.2.2 检测方法 DNA提取采用血液基因组提取试剂盒(Qiagen公司)。PCR扩增体系包括10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3)，50 mmol/L KCl，2.0 mmol/L MgCl2，200 μmol/L dNTP，300 nmol/L 引物，1.5 U 热启动 Taq酶，5 μl DNA 模板，总反应体积50 μl。反应条件:95 ℃ 15 min，95 ℃ 30 s，53 ℃ 30 s，72℃ 60 s，扩增35个循环;72℃延伸10 min。LDR反应体系包括20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6)，10 mmol/L MgCl2，100 mmol/L KCl，10 mmol/L 二硫苏糖醇，1 mmol/L EDTA，1 mmol/L NAD+，12.5 nmol/L探针或引物，3 μl PCR产物，2 U DNA连接酶，总反应体积20 μl。反应条件:95 ℃ 2 min，95 ℃30 s，50℃ 4 min，循环35次。扩增完成后加入EDTA终止反应。取2.5 μl反应产物与等体积上样缓冲液混合，然后94℃变性2 min，迅速在冰上冷却后于ABI Prism 377测序仪上凝胶电泳30 min，采用Genemapper软件进行分析。

表1 引物及探针序列

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件，基因多态性与病毒学应合采用Fisher精确检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-28B基因多态性频率分布 42例患者rs12979860基因型均为CC型;rs12980275基因型，AA 型 39 例 (92.9%)，AG 型 3 例(7.1%);rs8099917基因型，TT型39例(92.9%)，TG 型3例(7.1%)。……