文京华，李伯埙，黄小平，江卫红，朱彦菲，李武县

(1深圳市福田区第二人民医院，广东深圳518049;2西安交通大学医学院附属第二医院;3深圳市人民医院)

外阴鳞状细胞癌(VSCC)是较少见的恶性肿瘤，多见于60岁以上妇女，其病因及发病机制尚未完全明确。近年研究发现，表观调控机制在肿瘤的发生机制中起重要作用。为探讨VSCC的发病机理，我们检测了VSCC患者癌组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Bcl-2基因启动子的甲基化及其表达。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2006年1月～2011年1月在深圳市福田区第二人民医院和西安交通大学医学院附属第二医院行手术治疗的8例VSCC患者，年龄(43.5±9.6)岁;均经病理检查证实，其中高分化3例，中分化2例，低分化3例;有、无淋巴结转移各4例;临床分期Ⅰ～Ⅱ期5例，Ⅲ～Ⅳ期3例。患者均未接受过放、化疗。

1.2 检测方法 取8例患者的癌组织及毗邻正常皮肤组织(正常组织)手术标本，检测其VEGF、Bcl-2基因启动子的DNA甲基化及其表达。

1.2.1 DNA甲基化免疫共沉淀—实时定量聚合酶链反应技术检测DNA甲基化 参考文献［1］方法，并进行部分改良。即取VSCC及正常组织各25 mg，在液氮中用BioPulverizer粉碎机破碎，抽提DNA;用超声处理细胞悬液4 min，破碎后，取部分检测破碎效率，确定基因组DNA片段为200～1 000 bp。向超声后的各EP管中加入稀释缓冲液，使其体积均为700 μl，再加入蛋白 G 磁珠悬液 60 μl，4 ℃、垂直混匀器上混匀1 h;将上述EP管置于磁力架中，放置10 min以上，溶液完全澄清后，将上清转移至新的EP管中;加热95℃、10 min后，加入5-甲基胞嘧啶抗体8 μg，4℃、垂直混匀器上孵育过夜;加入偶联二抗……