吴水晶，沈寅华，丁恩平，谢美月，马震俊，周 华

(浙江大学医学院附属第一医院，杭州310003)

β防御素1(DEFB1)是最早发现的一种β防御素，它具有较强的广谱抗菌活性，能够杀死G+和G－菌、真菌、包膜病毒等多种病原微生物，并且可以趋化未成熟树突状细胞和记忆性T细胞到局部炎症反应部位发挥效应，在固有免疫和获得性免疫中发挥重要作用。本文通过对脓毒症患者和对照者DEFB1基因启动子区域－688G/C单核苷酸多态位点进行基因型分析，探讨DEFB1基因启动子区域－688G/C单核苷酸多态性与脓毒症易感性和预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2005年1月～2007年8月我院ICU病房确诊为脓毒症患者211例(脓毒症组)，男123例、女 88例，年龄(60.6±17.5)岁;死亡 110例，存活101例。脓毒症诊断严格按照1992年和2001年美国胸科医师学会和危重医学会联席会议制定的脓毒症诊断标准，并排除孕妇及年龄小于18岁的患者。对照组为157例浙江大学医学院附属邵逸夫医院同期择期手术后未并发脓毒症患者，男96例、女61例，年龄(58.4±18.3)岁。两组性别、年龄有可比性。

1.2 方法 在获得患者知情同意后，抽取外周静脉血10 ml于EDTA抗凝管。每一个样本移取200 μl用QIAamp DNA Blood Mini Kit(QIAGEN公司)严格按照说明书提取样本基因组 DNA。NCBI/Gene Bank网站获得DEFB1基因全长序列，premier 5.0引物设计软件设计PCR引物。引物序列如下:上游引物:5'-AGGTTAGGCAGTTCTGATGG-3';下游引物:5'-CCACTGAGACATCAGGAAAG-3'。引物扩增的PCR产物片段大小为547 bp，由上海生工生物技术工程技术服务公司合成。PCR反应体系为25 μl，包括:ddH2O 14.8 μl;10 × buffer 2.5 μl;dNTP(10 mmol/L)1.0 μl;上游引物(10 pmol/μl)1.0 μl;下游引物(10 pmol/μl)1.0 μl;MgCl2(25 mmol/L)2.5 μl;Taq DNA 聚合酶(5 U/μl)0.2 μl;模板 DNA 2 μl。Mastercycler gradient PCR 仪(德国 Eppendorf公司)中进行扩增。扩增条件为:95℃ 3 min，95℃ 10 s，56 ℃ 10 s，72 ℃ 30 s，72 ℃ 10 min，共35 个循环。利用Cac8I(New England BioLabs公司)对PCR产物进行酶切。……