李伟 陈余清 孙艳 赵成岭 王效静

蚌埠医学院第一附属医院呼吸科，安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室，安徽 蚌埠 233003

人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α对survivin的表达调控

李伟 陈余清 孙艳 赵成岭 王效静

蚌埠医学院第一附属医院呼吸科，安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室，安徽 蚌埠 233003

背景与目的：survivin是一种重要的抗凋亡基因，在肿瘤组织中特异性高表达，并参与调控细胞周期和细胞凋亡，其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切。但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少。课题组前期研究成功构建含有survivin核心启动子的荧光报告载体pGL3-SVP230-luc，并发现核心启动子区存在缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)的潜在位点。本研究拟通过免疫荧光双标记法、电泳迁移率实验(EMSA)、共转染等方法探讨缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α调控survivin转录的确切机制。方法：⑴运用免疫荧光双标记检测缺氧A549细胞中HIF-1α与survivin的表达；⑵HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别转染A549细胞，30 h后RT-PCR、Western blot和免疫荧光双标法检测survivin mRNA和蛋白表达；⑶pGL3-SVP230-luc(含有survivin核心启动子的荧光报告载体)与HIF-1α表达质粒和HIF-1α siRNA分别共转染A549细胞，测定萤光素酶的表达活性；⑷EMSA分析HIF-1α与survivin核心启动子结合情况；(5)流式细胞术和MTT法检测细胞凋亡和增殖。结果：⑴HIF-1α与survivin共表达于A549细胞中；⑵转染HIF-1α表达质粒组survivinmRNA和蛋白表达水平显著上调，转染HIF-1α siRNA组survivin mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.01)；⑶HIF-1α表达质粒组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为78.84，显著高于空质粒组及对照组(P＜0.01)，HIF-1αsiRNA组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为28.84，显著低于空质粒组及对照组(P均＜0.01)；⑷HIF-1α与survivin核心启动子区转录起始点上游-19～-16 bp序列结合转录激活survivin；……