张艳梅，杨雨旸，孙 尧

(1河北联合大学，河北唐山063000;2河北联合大学附属医院)

已有研究［1，2］证实脂联素水平与冠心病密切相关，因其与糖尿病和心血管病的潜在联系，其基因多态性近年来受到广泛关注。其中研究的热点集中在+45T/G和+276G/T单核苷酸多态性(SNP)位点，但研究结果因样本量、年龄、种族差异，不尽相同。2008年8月～2010年8月，我们通过对河北唐山地区冠心病及非冠心病的老年人脂联素基因(APM-1)第2外显子+45位点基因型的分布情况进行大样本调查，探讨脂联素SNP+45G/T与老年冠心病的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 病例组选择河北联合大学附属医院老年病科住院患者149例，均确诊为冠心病，其中男99例、女50例，年龄65～89(77±12)岁。经冠状动脉造影证实主要动脉(左前降支、左回旋支、右冠状动脉)中至少有1支内径狭窄＞50%，同时排除糖尿病。对照组为通过体检确定为未患有冠心病、糖尿病的正常健康人167例，其中男111例、女56例，年龄64～84(74±10)岁。所有受试对象彼此之间无血缘关系，有近期服药史者、患有严重的肝肾疾病者均排除本研究之外。两组间年龄、性别构成比相匹配。样本采集遵循“知情同意”原则。

1.2 样本采集 所有研究对象采集空腹静脉血5 ml，其中3 ml分离血清用于生化指标测定，2 m l用于基因组DNA提取。同时测量身高、体质量、腹围、臀围等。

1.3 聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法 采用苯酚—氯仿法提取基因组DNA。参照GenBank中APM序列自行设计一对扩增引物。5'-GCAGCTCCTAGAAAGTAGACTCTGCTG-3'，反向引物为 5'-GCAGGTCTGTGATGAAAGAGGCC-3'。扩增的目的片段长度为372 bp。PCR反应条件为:95℃预变性2 min后，95℃变性30 s，56℃退火40 s，72℃延伸40 s，共完成30个循环，72℃终末延伸7 min。……