(中国医科大学附属盛京医院，沈阳110004)

米托蒽醌是一种广谱的抗肿瘤类药物，其抗肿瘤活性高，而且抗瘤谱广泛。多西紫杉醇是近几年开发出的抗肿瘤新药，具有独特的抗癌作用机制，其抗瘤谱广。2010年3～8月，本研究采用米托蒽醌联合多西紫杉醇治疗乳腺癌细胞，通过免疫组化、Real-Time PCR和Western blot等技术，检测相关基因表达情况变化，探讨米托蒽醌和多西紫杉醇联合作用对乳腺癌治疗的作用。

1 材料与方法

1.1 试剂 高糖DMEM培养基购自Thermo Fisher公司，MCF-7细胞购自上海细胞库。米托蒽醌(Mitoxantrone)杭州民生药厂，多西紫杉醇购自罗纳普朗克乐安制药有限公司，总RNA提取试剂盒、TIANScript cDNA第一链合成试剂盒2×Taq Real Master-Mix(SYBR Green)均购自天根生物科技(北京)有限公司，引物合成由上海生工公司完成，增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki67单克隆抗体购于Abcam公司，免疫组化S-P试剂盒购自武汉博士德公司，其他为国产分析纯。

1.2 细胞培养 MCF-7细胞培养于含有10%胎牛血清的高糖DMEM培养基中，在37℃、5%CO2饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，细胞贴壁生长。每2～3 d传代1次，实验均选用对数生长期细胞。

1.3 模型建立及分组 建立裸鼠皮下移植瘤模型，取对数生长期MCF-7细胞，细胞浓度为5×106个细胞/m l，分别接种于裸鼠右前肢腋下部皮下接种。裸鼠在SPF条件下饲养，室温21～25℃，相对湿度60% ～70%，皮肤消毒后将细胞悬液接种于裸鼠右腋皮下，每只注射0.2 ml细胞。36只造模成功裸鼠随机分为4组，A组为对照组:生理盐水1 ml/100 g腹腔注射;B组为米托蒽醌治疗组:注射米托蒽醌20 mg/kg;C组为多西紫杉醇治疗组:腹腔注射多西紫杉醇30 mg/kg;D组为米托蒽醌联合多西紫杉醇治疗组:腹腔注射米托蒽醌20 mg/kg和多西紫杉醇30 mg/kg。……