冯 旭，覃家锦，周华富，郑宝石，何 巍

(广西医科大学第一附属医院，南宁530021)

基因的失活方式有很多，而启动子CpG岛的异常甲基化受到越来越多的重视［1］，最近研究证实启动子CpG岛甲基化可能在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展过程中发挥重要作用并且是导致抑癌基因失活的重要机制［2］。2009年9月～2010年7月，我们通过检测和比较RASSF1A和RPRM肺癌相关基因启动子CpG岛甲基化在肺鳞状细胞癌组织以及良性肺部疾病肺组织中的发生频率，建立广西肺鳞状细胞癌相关较为完整的甲基化谱，为临床早期诊断广西肺鳞状细胞癌提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 肺癌组为2008年9月～2009年6月在我院住院的广西肺鳞状细胞癌患者30例，其中男21 例、女9 例，年龄(52.3 ±1.2)岁，均经病理确诊。对照组为良性肺部疾病患者20例，其中男15例、女5例，年龄(46±1.25)岁，自发性气胸12例，肺囊肿8例。

1.2 标本采集与处理 肺癌组取手术中病理组织标本及癌旁正常组织，对照组取手术中组织标本，立刻置于液氮罐内，置－80℃低温冰箱待检。

1.3 甲基化特异性PCR(MSP)方法检测RASSF1A及RPRM ①标本细胞株DNA提取。用1 ml PBS悬浮沉淀物，转移入1.5 ml的离心管中，离心/去上清后，加入细胞裂解液(100 mmol/L NaCl，10 mmol/L Tris，25 mmol/L EDTA 0.2 ml，0.5%SDS)和终浓度为200μg/ml的proteinase K 0.2 ml。于50℃温育2 h后，酚/氯仿抽提2次，通过酒精沉淀获取DNA。加入0.3ml10mmol/L Tris，1mmol/L EDTA，pH7.5溶解，定量后置－20℃保存。②DNA非甲基化胞嘧啶的处理。亚硫酸氢钠处理:每个样品DNA取2μg，加入 ddH2O至总体积20μl，加入3 mol/L NaOH 2.2μl轻轻混匀后置37℃水浴15 min，以使基因组DNA充分变性，分别加入新鲜配制的对苯二氢醌12μl和NaHSO3208μl，混匀后覆盖消毒后的矿物油快速离心后，50℃反应16 h，使未甲基化的胞嘧啶转变为胸腺嘧啶。……