李峥嵘，姜慧峰

(1商丘市第三人民医院，河南商丘476000:2潍坊医学院附属莱阳中心医院)

结直肠癌的发生发展、浸润及转移过程中，需要细胞因子、体内微环境等多种因素的参与。E-钙黏素属于Ⅰ型钙黏素，主要参与细胞间的连接，维持细胞间黏附的稳定性和细胞的极性，与肿瘤细胞的浸润和转移有关。E-钙黏素的减少或丢失是上皮—间质转化(EMT)最重要的标志性变化，其表达调或抑制会开启EMT，导致肿瘤的浸润及转移［1］。转化生长因子β(TGF-β)是EMT中重要的诱导因素之一。2009年5月～2010年2月，我们对结直肠癌组织中E-钙黏素和TGF-β的表达变化进行观察，现报告如下并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院临床病理资料完整的结直肠癌(均为腺癌)组织蜡块56例。56例患者中，男33例，女23例;年龄40～81岁，平均65.77岁。高分化23例，中分化22例，低分化11例;临床分期:T4期18例，T3期28例，T2期10例。有癌细胞浸润44例，无癌细胞浸润12例;有淋巴结转移30例，无淋巴结转移26例。56例均为行手术治疗，术前均未经放化疗，均经病理确诊。另取癌旁正常组织为对照。

1.2 E-钙黏素、TGF-β 检测方法 抗 E-钙黏素鼠抗人单克隆抗体(4A2C7)、抗TGF-β鼠抗人单克隆抗体(TGFβ17)和 PV-9000二步法试剂盒。所有组织均经中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚切片，HE染色。采用免疫组化(PV-9000两步法)染色，按试剂盒说明书操作。用已知阳性切片作为阳性对照，以PBS替代一抗作为阴性对照。

细胞质有棕黄色颗粒者为E-钙黏素、TGF-β阳性细胞，按Shimizu等方法［2］根据着色深浅及面积评分判定结果:≥3分为阳性表达，其中3～4分为低表达(+)，5～6分为中表达(++)，≥7分为高表达(+++)。

1.3 统计学方法 数的比较采用Ridit分析和χ2检验，相关性研究采用Spearman等级相关分析法。α =0.05。

2 结果

2.1 结直肠癌组织与癌旁正常组织 E-钙黏素、TGF-β表达情况 结直肠癌组织中E-钙黏素、TGF-β 阳性表达率分别为 82.14%(46/56)，42.86(42/56)，癌旁正常组织中分别为100%和75.00%(P均＜0.05)。

2.2 结直肠癌组织中E-钙黏素蛋白、TGF-β的表达与其临床病理指标的关系 E-钙黏素的表达与结直肠癌分化程度、肿瘤浸润深度及有无单细胞浸润和淋巴结转移均有关(P均＜0.05)，TGF-β表达与肿瘤分化程度、浸润深度及有无单个细胞浸润和淋巴结转移均有关(P均＜0.05)。详见表1。

2.3 结直肠癌组织中E-钙黏素表达与TGF-β表达关系 结直肠癌组织中E-钙黏素表达与TGF-β表达无相关性(rs'=0.217 3，P≥0.05)。

3 讨论

体外实验证实E-钙黏素黏附能力的丧失是肿瘤细胞获得去分化和侵袭的第一步，E-钙黏素具有抑制肿瘤侵袭转移作用［3］。有学者研究发现［4］，E-钙黏素在大肠癌、胃癌、乳腺癌、食管癌等人体恶性肿瘤中呈低表达，且低表达组比高表达组侵袭能力强。TGF-β是肿瘤生长促进因子，不但可促使细胞周期阻滞、加速其凋亡，还能诱导维持EMT状态［5］。有实验证明［6，7］，TGF-β 能够诱导培养正常细胞和转化细胞形态的改变以及其EMT特征的出现，诱导皮肤鳞癌细胞发生 EMT，形成梭形细胞癌，提示TGF-β表达上调会开启EMT，并导致肿瘤的浸润及转移［8］。

表1 E-钙黏素、TGF-β表达与结直肠癌临床病理特征的关系

本实验研究发现，结直肠癌组织中E-钙黏素的表达明显低于癌旁正常结直肠组织，其表达水平随着肿瘤组织分化程度的降低、浸润深度的加深和发生单细胞浸润、局部淋巴结发生转移的产生而降低;TGF-β表达水平随着肿瘤组织分化程度的降低 、浸润深度的加深和发生单细胞浸润、局部淋巴结转移而升高。提示E-钙黏素、TGF-β与结直肠癌组织分化程度、浸润和转移关系密切。同时表明癌细胞浸润是EMT的形态学表现，是癌浸润的早期事件。E-钙黏素、TGF-β的表达无明显相关性，但二者均参与了EMT。

综上所述，结直肠癌组织中E-钙黏素呈低表达、TGF-β呈高表达，两者均与结直肠癌的分化程度、浸润和淋巴结转移关系密切。E-钙黏素和TGF-β在结直肠癌发生发展、早期浸润和转移中发挥重要作用。

［1］Boyer B，Vallés AM，Edme N.Induction and regulation of epithelial-mesenchymal transitions［J］.Biochem Pharmacol，2000，60(8):1091-1099.

［2］Shimizu M，Saitoh Y，Itoh H.Immunohistochemical staining of Haras oncogene product in normal，benign，and malignant human pancreatic tissues［J］.Hum Pathol，1990，21(6):607-612.

［3］Yu J，Ebert MP，Miehlke S，et al.Alpha-catenin expression is decreased in human gastric and in the gastric of first degree relatives［J］.Gut，2000，46(5):639-644.

［4］程秀娇，郑建盛，陈建阳.E-钙黏素和基质金属蛋白酶9与胃癌浸润转移的关系［J］.山西医科大学学报，2005，36(4):424-426.

［5］Zheng G，Lyons JG，Tan TK，et al.Disruption of E-cadherin by matrix metalloproteinase directly mediates epithelial-mesenchymal transition downstream of transforming growth factor-beta1 in renal tubular epithelial cells［J］.Am J Pathol，2009，175(2):580-591.

［6］Zavadil J，Bottinger EP.TGF-beta and epithelial-to-mesenchymal transitions［J］.Oncogene，2005，24(37):5764-5774.

［7］Han G，Lu SL，Li AG，et al.Distinct mechanisms of TGF-beta1-mediated epithelial-to-mesenchymal transition and metastasis during skin carcinogenesis［J］.Clin Invest，2005，1159(7):1714-1723.

［8］Sime PJ，O'Reilly KM.Fibrosis of the lung and other tissues:new concepts in pathogenesis and treatment［J］.Clin Immunol，2001，99(2):308.