阮中宝，杨向军，陈各才，朱 莉，李 伟，杨 兵，欧阳溪，潘少辉

(1苏州大学附属第一医院，江苏苏州215006;2泰州市人民医院;3江苏省北科生物科技有限公司)

间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点，在一定条件下能分化成为各种功能细胞，可被应用于多种疾病的治疗［1～3］。5-氮胞苷(5-aza)是胞嘧啶核苷的类似物，可引起DNA中某些胞嘧啶的低甲基化，从而参与激活表型特异性基因。2011年6～12月，本研究通过对人脐带源间充质干细胞(hUC MSCs)体外分离、培养，并采用5-aza诱导，旨在研究其在体外诱导分化为心肌细胞的可行性。

1 材料与方法

1．1 材料 5份脐带标本来源于泰州市人民医院2010年9月份产科足月顺产或剖宫产胎儿。主要试剂和仪器:DMEM/F12培养基(GIBCO，NVF0274);通用型SP Kit广谱免疫组化试剂盒、DAB染色试剂盒、Anti-cTnI抗体(北京博奥森生物技术有限公司);倒置显微镜(日本Olympus)。SP-9000:生物素标记山羊抗兔、大鼠和豚鼠IgG;SP-9001:生物素标记山羊抗兔IgG;SP-9002:生物素标记山羊抗小鼠IgG。

1．2 实验方法

1．2．1 hUC MSCs的分离和培养 取采集24 h内的新鲜脐带至培养平皿中，将脐带沿结扎内侧剪断，取中间部分。加入适量的生理盐水，洗涤脐带至表面干净无血，将脐带移至另一培养平皿中;将脐带剪成2～3 cm的小段，沿静脉血管剪开，将静脉血管壁和动脉血管剥离;将华通胶剥离，用组织剪剪碎至1 mm3大小，接种于T75培养瓶中，培养液为10 ml含10%FBS的DMEM/F12，倒置显微镜观察细胞形态。待细胞60%融合后，1∶3传代。传至3代后，部分细胞冷冻保存，部分细胞用于实验。整个过程在无菌条件下进行。……