徐礼臻，王勤章，韩 涛，丁国富，马克涛，王江平

(1石河子大学医学院，新疆石河子832008;2石河子大学医学院第一附属医院)

糖尿病膀胱病变(DC)的治疗仍是当今难点之一，主要原因是对其发病机制尚缺乏足够认识。有研究发现，膀胱Cajal样间质细胞(ICCs)在DC中起重要作用。我们前期的研究发现，糖尿病豚鼠膀胱中及体外高糖环境培养下，ICCs有形态、数量和超微结构的异常［1，2］。那么，是否正是由于高糖环境造成了ICCs的损害从而引起DC呢?为验证这一推论，2010年10月～2011年7月，我们观察了体外模拟高糖环境培养下ICCs具有起搏特征的内向电流变化，旨在探讨与膀胱自主收缩起搏密切相关的ICCs在DC发生、发展中的可能作用和病理生理学意义。

1 材料与方法

1.1 材料 健康豚鼠15只，3～4个月龄，雌雄不限，体质量500～700 g。主要试剂:磷酸盐缓冲液(PBS)，DMEM细胞培养液，D-葡萄糖，胶原酶。一抗为小鼠抗大鼠CD117抗体，即酪氨酸蛋白激酶受体(c-kit)蛋白特异性抗体;二抗为FITC标记山羊抗小鼠抗体，恒温细胞培养箱。实验用细胞外液成分(mmoL/L):NaCl 135，KCl 5，CaCl25，HEPES 5，D-Glucose 10，外液渗透压约 825.2 kPa，用 NaOH 将pH调至7.3。细胞内液成分(mmoL/L):Kgluconate 135，MgCl25，EGTA 1.1，HEPES 5，MgATP 5，Na2ATP 0.5，内液渗透压约 773.6 kPa，用 KOH 将 pH 调至7.2。主要仪器和设备:Olympus IX71倒置显微镜，制作玻璃电极用的毛胚(外直径1.5 mm，内直径为0.84 mm)，P97程控玻璃微电极拉制仪，Axonpatch-700B膜片钳放大器，MX7600R＆MX10L微操纵器。

1.2 方法

1.1 豚鼠膀胱ICCs的培养与分组 颈椎脱臼法处死豚鼠，无菌条件下取出膀胱，剥除膀胱黏膜层和浆膜层，剪碎至1 mm×1 mm×1 mm大小的组织块;经0.1%胶原酶Ⅴ37℃消化90min，离心后弃胶原酶PBS冲洗，加入DMEM培养基(含80%DMEM，20%FBS，1%ml Antibi-antibiotic)，充分吹打后将细胞悬液滴于6孔板内事先放置的盖玻片上。……