刘其雨，李 立，李晓延，陈 刚，赵英鹏，白建华，朱新锋

(昆明市第一人民医院，昆明650034)

钙神经素抑制剂他克莫司(FK506)是一种用于预防肝移植术后排斥反应的免疫抑制剂，但其药代动力学个体差异较大、治疗窗口狭窄，很难确定针对所有患者的固定剂量。研究发现，导致FK506血药浓度存在个体差异最主要的原因，在于肝脏对药物的代谢和清除。近来，有关FK506药代动力学与药物遗传学的研究备受重视，其中细胞色素P450酶系的CYP3A5研究较多。2008年1月1日～2010年9月31日，我们对67例接受原位肝移植术患者的CYP3A5进行基因多态性分析，探讨其对肝移植术后FK506用量的指导作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择在我院接受原位肝移植术的患者67 例，其中男58 例、女9例，年龄(48.1 ±9.5)岁，体质量(57.8±11.3)kg;其中 A 型血20例，B型21例，AB型8例，O型18例。术后免疫抑制治疗方案均采用FK506+吗替麦考酚酯(MMF)+皮质类固醇三联，FK506初始剂量0.05 mg/(kg·d)，术后7 d达到目标血药浓度7～10 ng/ml。

1.2 CYP3A5基因多态性检测 抽取患者外周血1 ml于抗凝管中，氯仿抽提法提取其基因组DNA，采用DNA直接测序法测序。方法如下:单核苷酸多态性(SNP)位点对应rs776746;引物设计:CYP3A5的上游引物为5'-CTTCTCCCCTCAAGTCCTCA-3'，下游引物为5'-CACAGGGAGTTGACCTTCATAC-3'，碱基数为609 bp。PCR反应体系为50 μl，其中模板1 μl、正反向引物均为 1 μl、dNTP 10 mM 1 μl、10 ×PCR Buffer(不含 Mg2+)5 μl、25 mM MgCl25 μl、Taq酶 0.5 μl、水 35.5 μl。PCR 反应条件:95 ℃预变性3min，94 ℃变性45 s，60 ℃退火35 s，72 ℃延伸90 s，共循环35个周期，最后一个周期于72℃修复延伸10min。PCR产物经1%琼脂糖电泳后经PCR产物纯化回收试剂盒(上海生工 SK1141)回收产物，于3730测序列分析仪直接测序，最终判定CYP3A5基因的SNP。

1.3 FK506全血谷浓度检测 于服药后1周、2周、1个月抽取患者外周抗凝血1 ml，采用ELISA法检测FK506全血谷浓度。……