王小春，田 静，李德冠，吴红英，王月英，孟爱民

(1中国医学科学院放射医学研究所，天津300192;2山东省肿瘤医院)

Cks1是高度保守的细胞周期调节蛋白SUC1/Cks家族成员之一，是周期蛋白依赖性激酶复合物的亚基，能与其他周期蛋白依赖性激酶和磷酸化的蛋白结合，参与细胞周期的调控，与肿瘤的发生、发展密切相关。我们前期的研究发现，Cks1在乳腺癌组织中高表达，而且其高表达与乳腺癌的淋巴结转移和临床分期相关。2009年5月～2011年5月，我们观察了抑制Cks1表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭、转移能力的影响，并探讨其可能的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 人乳腺癌细胞株 MCF-7，Scrambled siRNA(与人类基因组序列无同源性)及Cks1 siRNA(5'-GGGACATAGCCAAGCTGGTCgagtactgGACCAGCTTGGCTATGTCCC-3')由Invitrogen公司合成，MTS试剂盒，Transwell小室，蛋白裂解液，兔抗人Cks1、MMP-2、MMP-9(均 1∶500 稀释)抗体，鼠抗人-actin抗体(1∶5 000 稀释)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与分组 将MCF-7细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。将细胞以6×105/ml接种6孔板，16 h后观察组细胞经脂质体转染Cks1 siRNA，对照组细胞转染Scrambled siRNA;继续培养48 h，将细胞按1∶10传代;然后加入G418进行筛选，每隔2～3 d换液1次，10～14 d有明显克隆形成。

1.2.2 MCF-7细胞增殖活性观察 采用MTS法。取6孔板中转染36 h的MCF-7细胞，调整细胞浓度为4×104/ml，以 100 μl/孔接种 96 孔板。接种后24、48、72、96 h(即转染 60、84、108、132 h)，每孔加20 μl MTS检测试剂，于37℃、5%CO2培养箱中孵育2 h，用酶标仪测定492 nm波长时MCF-7细胞的OD值，以此表示细胞增殖活性。实验重复3次，取平均值。

1.2.3 MCF-7 细胞侵袭、转移能力观察 采用Transwell小室检测。MCF-7细胞转染后48 h，用无血清RPMI1640培养基饥饿12 h。调整细胞浓度为1×106/ml，每个侵袭小室上室加100 μl细胞悬液，下室加600 μl含10% 胎牛血清的RPMI1640培养基。其中侵袭实验在小室接种细胞前一晚将基质胶用无血清RPMI1640培养基稀释成浓度为1∶7，每个侵袭小室加60 μl，而迁移实验不加基质胶。……