(广东医学院医学检验学院，广东东莞 523808)

肥大细胞(MC)是一类重要的免疫细胞，在超敏反应、肿瘤等疾病的发生发展中通过活化MC产生并释放炎症介质而发挥重要作用［1］。MC羧肽酶(MC-CP)是MC特异性蛋白酶，是过敏反应性疾病的生物标志物［2，3］。天然MC-CP的纯化极为困难，我们曾用原核表达技术制备了重组人MC-CP(hMCCP)及其抗体，通过原核表达获取的hMC-CP重组蛋白不具天然构象，获取的hMC-CP抗体所针对的表位为线性表位［4］;而构象表位通常是优势表位，针对构象表位的抗体才具有更高的检测灵敏度。DNA免疫作为一种以核酸为基础的全新免疫接种技术，外源基因在小鼠体内表达出具有天然构象的蛋白，激发机体发生免疫应答，并可用于抗体的制备。基于难于获取具有天然结构的hMC-CP，为进一步获取针对构象表位的hMC-CP抗体，2010年8月～2011年3月，我们进行了hMC-CP真核表达重组质粒DNA的免疫原性研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 pcDNA3.1载体、大肠杆菌DH5α，纯化的重组hMC-CP蛋白［5］以及分泌型hMC-CP真核表达质粒(pcDNA3.1/S-CP)［6］由本室制备并保存;pGEM-T载体，DNA 凝胶回收试剂盒与质粒抽提试剂盒，KpnⅠ、XhoⅠ限制性内切酶和T4DNA连接酶，无内毒素质粒大提试剂盒，DAB，HRP标记的羊抗鼠IgG，常规试剂为国产分析纯。PCR引物合成及DNA序列测定委托上海生物工程公司完成。BALB/c小鼠，雌性，6周龄。

1.2 方法

1.2.1 hMC-CP编码区基因片段的扩增 以含hMC-CP基因的质粒［5］为模板，用以下引物做PCR扩增，P1:5'-GGTACCGCCGCCGCCATGAACTCATCCTGCCTGTGGG-3'(有下划线者为 KpnⅠ酶切位点)，P2:5'-CTCGAGTTAGGAAGTATGCTTGAGGATATAC-3'(有下划线为XhoⅠ酶切位点)。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳后，出现1条长约1 300 bp的条带，与预期结果相符。……