宋之明 张绍昆 孙 洋 任 琦 (吉林大学第一医院骨科，吉林 长春 300)

软骨损伤较为常见，但由于软骨缺乏血管分布和神经支配，因而损伤后难以自身修复。目前临床治疗软骨缺损的方法很多，随着组织工程技术的发展，利用软骨细胞移植方法修复软骨缺损的研究逐渐成为热点〔1，2〕。但由于自体软骨在体内分布较少，可获取的软骨细胞数量有限;同时软骨细胞的代谢和增殖能力低，体外长期培养易出现去分化现象，难以保持软骨细胞表型，因而获取足够数量和维持表型的自体软骨细胞对于软骨组织工程修复软骨缺损具有重要的意义。胰岛素样生长因子I(Insulin-like growth factor-I，IGF-I)是软骨形成和代谢中最重要的生长因子之一，体内外的研究表明IGF-I能刺激软骨细胞分裂增殖，并合成Ⅱ型胶原和蛋白多糖维持软骨细胞的表型〔3～7〕。本研究利用逆转录病毒介导的方法将具有促进软骨细胞增殖和维持软骨细胞表型作用的人IGF-I(hIGF-I)基因转染兔关节软骨细胞，并检测基因转移后对软骨细胞生物学行为的影响，为软骨组织工程和基因治疗软骨缺损奠定实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒 含有hIFG-I基因的逆转录病毒载体pLNC-IGFGFP由本实验室构建并保存。

1.1.2 实验动物 清洁级2周龄灰兔，雌雄不限，购自长春生物制品研究所实验动物室。

1.1.3 主要试剂 DMEM(高糖)培养基购自Hyclone公司;胎牛血清购自中国医学科学院;胰蛋白酶购自Amresco公司;polybrene、G418均购自 Invitrogen公司;牛血清白蛋白、噻唑蓝(MTT)!硫酸软骨素、木瓜蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和……