周建月 田晓丰 鞠海英 (广西医科大学第一附属医院输血科,广西 南宁 5300)

Duffy血型在人类学研究中是一个有用的工具。1950年在多次输血的血友病患者血清中发现的抗 Fya和 1951年在一名产妇血清中发现的抗 Fyb是 Duffy血型系统中最常见的两个抗体〔1〕。 Duffy血型系统有 6个抗原,即 Fya(FY1)、Fyb(FY2)、Fy3(FY3)、Fy4(FY4)、Fy5(FY5)、Fy6(FY6)。 Duffy血型的基因位于染色体 1q22-23,由于 44号氨基酸的改变出现 FY 1和FY 2这两种基因型〔2〕。近些年分子生物学技术在血型研究领域的应用越来越多,本文采用PCR-SSP方法对广西地区健康献血者进行 Duffy血型的基因分型研究。

1 材料与方法

1.1 样本 随机抽取 89名汉族健康献血者应用 EDTA抗凝的全血 200μl。采用快速盐析法提取 DNA〔3〕,注射用水 20μl溶解待用。

1.2 引物设计 根据 FY1和FY2基因背景的不同设计引物。FY 1:5′-AATGATCTTCTCCCGAATGGAG-3′,FY 2:5′-AATGATCTTCTCCCGAATGGAG-3′, 反 向:5′-CACTGGCCCCACACCTAGGTT-3′,PCR产物长度 218 bp。内对照为人类生长激素(hGH)基因特异性引物,hGH-A链引物序列:5′-TGCCTT CCCAACCATTCCCTTA-3′,B 链 引 物 序 列:5′-CCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTG-3′,扩增产物为 434bp。

1.3 Duffy血型基因分型检测 PCR反应体系为 10μl,包括PCR引物混合物(序列特异性引物 0.4μmol/L,内对照引物0.4μmol/L)、10×PCR Buffer 1μl,d NTP 0.2 mmol/L,Taq酶0.1U和 DNA 0.4μg。 反应条件:94℃ 3 min;94℃ 30 s,60℃30 s,72℃ 30 s,30个循环;72℃ 5 min;4℃保存。样本扩增结束后 PCR产物在 2%琼脂糖凝胶电泳 30 min,记录凝胶成像结果并分析。

2 结 果

带有Fya基因的个体在FY 1特异性引物扩增后出现218bp的特异性条带,带有Fyb基因的个体在FY 2特异性引物扩增后出现 218 bp的特异性条带。仅有 Fya基因条带,没有Fyb基因条带的判定为 Fy(a+b-);没有 Fya基因条带,仅有Fyb基因条带的判定为 Fy(a-b+);既有 Fya基因条带,又有 Fyb基因条带的判定为 Fy(a+b+)。Duffy血型基因分型检测结果见图 1。本研究 89份健康献血者样本检测结果:Fy(a+b-)78人(87.64%),Fy(a-b+)3人(3.38%),Fy(a+b+)6人(6.74%),Fy(a-b-)2人(2.24%)。Duffy血型中 Fya的基因频率是 0.931,Fyb的基因频率是 0.069(此试验只针对 Fya、Fyb基因设计,故 Fy(a-b-)2例不统计在内)。……