李鸿梅 王敬春 齐占朋 王 睿 李雪岩 刘吉成

(齐齐哈尔医学院中心实验室,黑龙江 齐齐哈尔 161006)

白血病的治疗一直以化疗为主,大多数化疗药物都通过诱导细胞凋亡来达到消灭肿瘤细胞的目的,但是化疗药物在诱导肿瘤细胞凋亡的同时对机体正常细胞的毒性作用也不容忽视。此外,肿瘤细胞对化疗药物产生耐药,也使化疗的疗效大大降低,甚至导致化疗失败。因此,从天然药物中寻找既可提高治疗效果又能减少对机体副作用的抗肿瘤活性成分,是当今抗肿瘤药物发展的主要方向之一。齐墩果酸(oleanolic acid,OA)是一种天然来源的药物,广泛存在于植物中,以游离或结合成苷的形式存在。近年来,人们发现 OA可以通过多种机制抑制肝癌、结肠癌、肺癌和顺铂耐药胃癌细胞增殖〔1～5〕,但是 OA对体外培养的人早幼粒白血病(M3型)NB4细胞的作用未见报道。本实验以 M3型白血病 NB4细胞为研究对象,以不同剂量的OA处理,观察其对细胞增殖的影响及其对凋亡相关基因Bcl-2及 Bax基因表达的影响,以探讨OA抑制细胞增殖的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 M3型白血病细胞株 NB4(中国科学院上海细胞库);OA(中国药品生物制品检验检定所)。OA用二甲基亚砜(DMSO)溶解配制成 80 mmol/L的原液,-20℃储存;用含10%小牛血清 RPMI-1640培养基稀释成不同浓度的工作液。RPMI-1640和小牛血清(Gibco);SYBR ExScriptTMRT-PCR kit(Perfect Real Time,TaKaRa公司)。

1.2 NB4细胞的培养 细胞常规培养在 RPMI-1640培养基中,用灭菌的 5.6%NaHCO3溶液将培养基的 pH调至 7.2,每100ml培养基含青霉素 1万 U,链霉素 10mg、小牛血清 10 ml。细胞置于 CO2孵箱,37℃、5%CO2、95%湿度条件下培养。为避免由于细胞密度过大而给细胞生长和生存带来的可能的影响,每天通过增加新鲜的培养基来调整细胞密度,使细胞密度不超过 5×105个/ml。……