邢邯英 野战鹰 张冬会 付玲娣 裴华颖 (河北省人民医院老年医学重点实验室,河北 石家庄 050051)

氧化应激在糖尿病肾病(DN)的发生和发展中起重要作用,高血糖诱导的活性氧产生增多是糖尿病(DM)血管并发症包括 DN在内发生的主要因素。血红素加氧酶-1(HO-1)被证实是重要的生理性氧自由基清除剂,体外实验表明,在严重缺氧情况下,其抗脂质过氧化的能力优于维生素 E,被认为是最佳的抗自由基物质。可见 HO-1是细胞的一种内源性保护蛋白,那么激活的HO-1通路是否可以起到对抗 DM肾脏氧化损伤的作用呢?本实验复制了 DM大鼠模型,观察 HO-1的诱导剂正铁血红素(Hemin)和其抑制剂锌原卟啉(ZnPP)对 DN大鼠肾功能和氧化应激状态的影响,探讨HO-1与 DN的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 链脲佐菌素、Hemin、ZnPP均购自美国 Sigma公司;逆转录酶为Promega公司产品;血清总抗氧化能力(TAOC)和丙二醛(MDA)检测试剂盒购自南京建成生物试剂公司。PCR扩增体系为北京赛百盛基因技术有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 DM大鼠模型的制备和分组 将雄性 SD大鼠随机分成 4组:①生理溶剂对照组;②DM组:大鼠按 50 mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素以诱导 DM,于模型成功后 5 w,10 w和15 w处死动物;③Hemin组:确认 DM大鼠模型成功后每日腹腔注射 Hemin 30μmol/kg,连续 5 w;④ZnPP组:确认模型成功后腹腔注射 ZnPP 10μmol/kg,连续 5 w。

1.2.2 血清 TAOC和 MDA含量测定 全血 4℃离心3 000 r/min,10 min。取血清分装待测。按试剂盒说明操作。

1.2.3 尿白蛋白排泄率(UEA)检测 留取 24 h尿液-20℃冰箱保存待测 UEA。

1.2.4 RT-PCR技术检测肾脏 HO-1、TNF mRNA表达 取各组大鼠肾组织,Trizol一步法提取总 RNA,在逆转录酶催化下合成 cDNA。HO-1的上、下游引物分……