邢少姬 张利芳 韩丽红 程子英

(包头医学院医学技术学院临床生物化学与检验教研室,内蒙古 包头 014060)

维生素 D受体(VDR)被认为是遗传调控骨和钙代谢的主要候选基因之一。1994年 Morrison等〔1〕首先报道 VDR基因 3,端 Bsm1多态性与骨密度(BMD)相关以及可以预测 BMD。以后有研究〔2～6〕发现在 VDR基因的 5′端第二个外显子中,存在Fok1内切酶的多态性酶切位点,由于该位点是至今发现的唯一影响 VDR氨基酸结构的多态性位点并与 BMD相关而备受关注。BMD是目前诊断OP的一个金标准,它受营养、运动、遗传及激素水平等多种因素,其中遗传是影响BMD的主要因素。本文就内蒙古地区老年女性VDR基因Fok1多态性与 OP的关系进行临床观察分析,为内蒙古地区OP的研究提供依据。

1 对象与方法

1.1 对象 102名老年(年龄 ＞60岁)女性,分为两组:①OP组:患者(以同部位正常年轻女性平均 BMD峰值减低两个标准差为 OP诊断标准)32例,平均年龄(72.5±6.4)岁。均无高血压、肾病、糖尿病等内分泌系统疾病病史,无使用糖皮质激素史。②对照组:健康体检人员 70例,平均年龄(70.5±5.2)岁。均无高血压、肾病、糖尿病等内分泌系统疾病病史,并且均未应用过影响骨代谢的药物。

1.2 方法

1.2.1 BMD测定 采用双能X线BMD测定的方法(美国Lunar公司),由专职人员测量。测第 2～4腰椎正位骨密度,准确定位后开始扫描,由微机自动分析及打印结果。

1.2.2 DNA提取 利用常规酚-氯仿抽提法从全血中提取DNA。

1.2.3 引 物 设 计 参 照 文 献〔2〕:P1:5′-AGCTGGCCCTGGCACTGACTCTGCTCT-3′;P2:5′-ATGGAAACACCTTGCTTCTTCTCCCTC-3′。

1.2.4 PCR扩增体系与参数 反应的总体积 25μl,含模板150 ng,两端引物各 6 pmol,TaqDNA聚合酶 0.5 U,d NTP(25mmol/L)0.4μl及相应的缓冲液(含 MgCl220 mmol/L),无菌去离子水。PCR反应程序:95℃预变性 3 min,然后 95℃变性,50 s;退火 60℃,50 s;72℃延伸 1 min,30个循环,最后延伸5 min。……