赵正娟 田伟 赵敬军，2

(1.福建医科大学协和临床医学院皮肤科，福州 350001;2.同济大学附属同济医院，上海 200065)

近年来，随着医疗水平的提高，器官移植、骨髓移植等侵入性治疗增多，临床免疫抑制剂、糖皮质激素使用增加，人群免疫力降低，导致真菌感染机会增加。传统的菌种鉴定方法 (如分泌物直接镜检、培养、生理生化方法)费时费力(真菌生长速度在2 d～3周不等)，存在阳性率低和需要专业人员操作等局限性。而侵袭性真菌病病死率较高，病情发展迅速，为了快速准确地诊断疾病，做到早诊断、早治疗、降低死亡率，分子生物学方法开始用于菌种鉴定。这些方法包括:限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、扩增片段长度多态性分析 (AFLP)、单链构象多态性(SSCP)、随机扩增多态性DNA分析(RAPD)、末端片段长度多态性分析 (tFLP)、脉冲凝胶电泳法(PFGE)、DNA序列分析及多位点序列分型(MLST)等。DNA序列分析方法用于研究生物分类和进化，可以克服DNA指纹法的局限性。大量的性状可以直接观察到，如碱基的变化与颠换，不活动性与有选择性，核苷酸的变化趋势，这些变化在物种系统发育分析时都可以以不同的方式表现出来，公开发表的序列都可以直接用来进行比较和分析。

1 DNA序列分析的应用

DNA序列分析对于了解真菌的基因结构、表达及分子进化关系等具有十分重要的意义。序列测定是对致病真菌分类鉴别的重要手段。目前应用较多的为18 S rRNA基因大亚基的D1-D2区、基因内间隔区IGS(intergenic spacer)、内转录间隔区ITS(internal transcribed spacer)、蛋白编码区和一些管家基因。……