水动力转染技术的应用进展
2011-02-12师长宏
中国比较医学杂志 2011年1期
白 冰,赵 勇,张 海,师长宏
(第四军医大学实验动物中心,西安 710032)
将外源基因导入动物体内并获得高效表达,是分子生物学、基因功能和调节、蛋白结构和功能、基因治疗以及生物工程等研究领域前进发展至关重要的能力。这种能力甚至比人类基因组和基因克隆工程更重要。所以,迫切需要发明一种能使外源基因在活体内高效表达,以便研究基因功能,为疾病的治疗学研究打下基础。水动力转染技术作为一种简便、快速、高效的转染方法得到了广泛的应用。
1 水动力转染方法的概述
Wolff等[1]将裸质粒DNA肌肉注射在小鼠体内,首次发现在注射部位有目的基因的表达,根据Wolff最初的发现,许多实验室进行了多次类似的相关研究。证实了利用局部给药的方法将外源基因注射在小鼠体内,发现在动物肝脏[2-4]、肺脏[5]、心脏[6]和皮肤[7]等部位都表达了目的基因。虽然,应用裸质粒DNA转染不需要相应的病毒载体,省去了载体的制作过程,宿主也不会受病毒载体免疫遗传学和致瘤因素的影响,更不会有内源性病毒重组的危害[8],但由于转基因表达水平很低,在治疗学应用上还有许多关键问题不能解决。直到1999年,Zhang等[9,10]从小鼠的尾静脉快速注射了大体积(约2~3mL)含裸质粒DNA的生理盐水后,在肝脏细胞中直接检测到了转染的基因高水平且长时间的表达。才将该方法正式命名为水动力转染法(hydrodynamics-based transfection)。
水动力转染方法是指通过一种全身给药的方法,即从小鼠的尾静脉快速注射大体积(8~12mL/100g体重)含目的基因质粒DNA的生理盐水,从而达到外源基因在小鼠体内高效表达。……
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