刘 芳，张新日，张 岩

（山西医科大学第一临床医学院呼吸科，太原 030001）

呼吸机所致肺损伤（ventilator induced lung injury，VILI）是影响机械通气临床疗效的一个重要因素，研究VILI的发生机制和防治措施对提高机械通气的应用水平以及危重症患者的救治水平均具有重要意义［1］。本研究拟通过动物试验，探讨糖皮质激素对大潮气量机械通气大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及一氧化氮（NO）表达的干预作用。

1 材料和方法

1.1 动物分组与模型制备

雄性健康Wistar大鼠24只（山西医科大学实验动物中心提供）［SCXK（晋）2009-001］，体重310～380g，随机分为3组①对照组：未行机械通气；②机械通气组：VT=40mL/kg；③地塞米松干预组：VT=40mL/kg，通气前1h经腹腔注入DXM（6mg/kg）。

用25％乌拉坦4mL/kg腹腔注射将大鼠麻醉后行气管切开。除对照组外，其余大鼠均通过胶管与动物人工呼吸机（DH-150型，浙江大学医学仪器厂制造）连接，进行机械通气。各组大鼠的通气参数除潮气量外，其余参数均相同，即I∶E=1∶3，FiO2=21％，F=60次/min，通气时间为90min。

通气结束后经腹主动脉取血2～3mL，肝素钠抗凝，离心取上清液置于EP管中，-80℃冻存备用。然后将大鼠放血处死，切取肺脏。在无菌状态下取右肺上叶置于已消毒的EP管中，-80℃冰箱保存，用于RT-PCR及肺组织NO测定。取右肺下叶以10％中性福尔马林灌注固定，24h后行常规石蜡包埋，用于HE及免疫组织化学染色。

1.2 RT-PCR法检测肺组织iNOSmRNA的表达

用Trizol（TaKaRa宝生物工程有限）提取肺组织总RNA，以大鼠GAPDH（磷酸甘油醛脱氢酶）作为内参。大鼠iNOS及内参引物由北京奥科生物技术有限公司合成。大鼠iNOS及内参（GAPDH）引物由北京奥科生物技术有限公司合成。iNOS上游引物：5’-GGC TCC AGC ATG TAC CCT-3’；……