李明岳，鲍世韵，刘嘉林，郑锦锋，林宝行，余小舫

（暨南大学第二临床医学深圳市人民院，深圳 518020）

组蛋白在翻译后的修饰中会发生改变，从而提供一种识别的标志，为其它蛋白与DNA的结合产生协同或拮抗效应，是一种动态转录调控成分［1］。染色质免疫共沉淀-实时定量PCR法（chromatin immunoprecipitation-real time quantitative PCR methods，CHIP-PCR）技术可以检测特定DNA序列染色质的结构，能够充分反映生理条件下的DNA与蛋白质相互作用的真实情况［2］。MafA基因又称亮氨酸拉链蛋白Maf家族A（v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene family protein A，MafA），是一个关键的基因特异性表达的调节器，对于胰腺生长和β细胞的分化及β细胞正常功能的维持起重要作用［3］。本研究采用CHIP-PCR技术比较小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cell，mES）、NIH小鼠成纤维细胞（NIH 3T3）和小鼠胰岛素瘤β细胞（NIT-1）之间MafA基因转录起始区的组蛋白修饰变化，以管家基因MLH1为对照，探讨组蛋白修饰对MafA基因转录表达的作用。

1 材料和方法

1.1 主要材料和仪器

（1）129/J小鼠胚胎干细胞（40 XY）和γ射线照射处理的第3代昆明小鼠胚胎成纤维细胞由赛业（广州）生物科技有限公司提供。小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞和小鼠β细胞株NIT-1细胞由中山医科大学动物实验中心细胞库提供，上述两细胞均来自美国ATCC细胞库；（2）组蛋白H3K4三甲基化（histone 3 lysine 4 trimethylation，H3K4m3）抗体（Abcam）、组蛋白H3K9三甲基化（histone 3 lysine 9 trimethylation，H3K9m3）抗体（Abcam）、组蛋白H3乙酰化抗体（Upstate）、抗小鼠Ig-G磁珠（BioLabs）；（3）超声仪器Bioruptor（Diagenode）、Nanodrop（Agilent）、TaKaRa PCR Thermal Cycler（宝生生物工程有限公司）、ABI 7700 Realtime PCR仪（ABI）；（4）引物设计软件：Primer 5.0。

1.2 细胞的准备

1.2.1 mES细胞的培养：预先准备由明胶包被的六孔板培养器皿，饲养层细胞是经γ射线照射处理的第3代昆明小鼠胚胎成纤维细胞。加入解冻后的mES细胞悬液和129/J小鼠胚胎干细胞完全培养基，在37℃、5％CO2、80％相对湿度的培养箱中培养。……