标准SDS-PAGE图法测定大豆11S抗原蛋白含量的研究

2011-01-27梁运祥

饲料工业 2011年7期

石慧梁运祥

石慧梁运祥

分离纯化获得高纯度的大豆11S抗原蛋白后，以100μg/ml为浓度梯度差，制备100～2000μg/ml浓度的11S抗原蛋白标准溶液，用SDS-PAGE电泳法制得梯度清晰的11S抗原蛋白浓度标准图。将待测定样品SDS-PAGE电泳后，通过与标准图比较可方便读出样品中11S抗原蛋白的浓度C0，并结合运用公式W=2.15×10-5·C0×100%，可快速计算出样品中11S抗原蛋白的含量。该测定方法具有方便、准确、灵敏度高等特点，适合进行大规模样品11S抗原蛋白含量的测定。

11S抗原蛋白；SDS-PAGE；含量；测定

大豆抗原蛋白中11S抗原蛋白含量约为43.6%[1]，是大豆中主要抗原蛋白之一。作为大豆中含量最高的抗营养因子及大豆的主要蛋白成分，近年来在动物饲料的应用上备受关注。但研究主要集中在分离纯化11S抗原蛋白，分解去除抗原蛋白。除了彭楠等[2]用酶联免疫法测定了大豆11S抗原蛋白，11S抗原蛋白的定量测定方法鲜有报道。李成贤[3]总结了大豆主要抗原蛋白的测定方法，实际上大多数是分离纯化法，虽然也可以用于测定，但当抗原蛋白含量较少时，这些方法灵敏度低，甚至不能完成测定，而且批次多时并不方便、快捷，故这些分离纯化法用于测定存在很多问题。本文采用Thanh等方法[4]纯化大豆11S抗原蛋白，并干燥至恒重，制成11S抗原蛋白浓度标准SDSPAGE图，只要把待测样品抗原蛋白稀释到标准图的浓度范围，就可以完成11S抗原蛋白的测定，该法甚至可以检测到含量极微的11S抗原蛋白，快捷、方便，灵敏度高。