96孔板-PCR排除法筛选猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因
2010-08-06魏冬霞吴绍强林瑞庆宋慧群朱兴全
中国预防兽医学报 2010年9期
关键词:检测
魏冬霞,邓 艳,吴绍强,林瑞庆,宋慧群,朱兴全
(1.江苏畜牧兽医职业技术学院动物医学院,江苏泰州225300;2.华南农业大学兽医学院,广东广州510642;3.广州机场出入境检验检疫局综合实验室,广东广州510470;4.中国检验检疫科学研究院,北京100029)
猪蛔虫病是由蛔科(Ascaridae)的猪蛔虫(Ascaris suum)寄生于猪小肠引起的一种线虫病。该病不仅给养猪业造成严重经济损失,而且由于猪蛔虫感染性幼虫还会引起人的眼幼虫移行症和内脏幼虫移行症,对人类健康构成危害[1-2]。由于猪蛔虫产卵量大,虫卵对外界环境抵抗力强等因素,从而造成猪蛔虫病的广泛流行。卵黄蛋白原(VIT)为雌性肠道上皮细胞合成的一种具有脂类结合能力的蛋白质,它可以通过受体介导的细胞内吞作用进入卵巢中的胚胎内,为后代的发育提供能量。如能选择性地抑制或阻断猪蛔虫雌虫VIT基因的表达,则可抑制成虫的繁殖及产卵,从而有效地控制猪蛔虫病的传播和流行。本研究以猪蛔虫雌虫VIT基因的EST序列为模板设计引物,对猪蛔虫雌虫cDNA文库进行筛选,并获得了猪蛔虫VIT基因序列,为该基因的深入研究奠定基础。
目前用于文库筛选的方法很多,传统的文库筛选方法包括原位杂交筛选、抗体筛选和功能表达筛选。这些方法的缺点是消耗材料多,并且费时费力。而以PCR为基础的筛选文库方法具有许多优势[3-5]。本研究利用PCR法和排除法相结合的96孔板-PCR排除法对猪蛔虫雌虫的cDNA文库进行筛选,获得了猪蛔虫雌虫VIT基因序列。……
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