吕敏娜，覃宗华，余劲术，袁建丰，孙铭飞，吴彩艳，蔡建平

(广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生实验室，广东广州 510640)

埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli)是一种血清型多样、能感染各种动物和人类并引起严重疾病的革兰氏阴性菌。由于抗生素的滥用/误用，导致E.coli耐药性菌株不断出现，给养殖业造成严重的经济损失，对动物和人类的健康都造成了危害，因此，免疫预防已成为防治E.coli病的首选方法。

细菌菌蜕(Bacterial ghost)是指缺乏细胞浆和核酸的无活力细菌菌(壳)体[1-2]，是在噬菌体phiX174的裂解基因E所表达的裂解蛋白作用下，在G-细菌细胞膜上形成直径约40 nm～200 nm的特异性跨膜孔道，在渗透压差的作用下，细菌的胞质内容物由孔道流出[3-4]，从而产生的细菌空壳。菌蜕完好地保留了菌体表面的各种抗原结构和粘附活性，可以类似活菌体诱导机体产生良好的免疫保护反应[5-6]。菌蜕技术被认为是研究开发新型基因工程疫苗的技术平台[7-8]。本研究通过构建鸭源E.coliO78/pHH43菌蜕及其免疫原性的试验研究，为进一步研制非变性灭活基因工程菌蜕疫苗奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 主要材料 含有E基因的裂解重组质粒pHH43为本研究室保存；鸭源E.coliO78为本课题组从广东省珠三角地区某发病鸭场分离、鉴定并保存的菌珠；庆大霉素、氯霉素均购自上海生工生物工程服务有限公司；实验雏鸭购自广州市郊某养鸭场。

1.2 E.coliO78/pHH43菌蜕的制备

1.2.1 质粒pHH43转化E.coliO78将pHH43转化氯化钙法制备的感受态E.coliO78后，以含氯霉素(34 μg/mL，以下同)的LB琼脂平板进行筛选，挑取单菌落于含氯霉素的LB液体培养基中培养。……