志贺氏菌属环介导恒温扩增快速检测方法的建立及初步应用

2010-08-06徐义刚崔丽春张昕哲李苏龙于恒纯张子群李丹丹

中国预防兽医学报 2010年9期

徐义刚，崔丽春，张昕哲，李苏龙，于恒纯，张子群，李丹丹

(1.黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，黑龙江哈尔滨150001；2.东北林业大学，黑龙江哈尔滨150040；3.东北农业大学，黑龙江哈尔滨150030；4.海南出入境检验检疫局，海南海口570125)

志贺氏菌(Shigella)俗称痢疾杆菌，是一类引起人急性感染性痢疾的最常见病原菌。人主要通过食用被志贺氏菌污染的食品而感染发病，以全身中毒症状和大肠化脓性炎症为主要临床特征，具有公共卫生学意义[1]。建立志贺氏菌快速、准确、灵敏、特异的检测方法，不仅为及时有效控制食源性传染病提供依据，同时也是保障人类健康的必要手段。

目前，我国志贺氏菌属的检测方法主要采用国标法(GB/T4789.5-2003)，该方法主要为细菌分离和培养鉴定，操作繁琐，检测周期长，并且灵敏度低。其他检测方法，如ELISA、PCR、实时荧光PCR(real-time PCR)等，则存在检测灵敏度低(ELISA法)和检测仪器昂贵(real-time PCR仪)等问题[2-5]。Notomi等研发的环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，针对靶基因的6个区域设计4条特异引物，利用链置换DNA聚合酶在恒温条件作用40 min～60 min，即可完成核酸扩增反应，直接通过扩增副产物焦磷酸镁沉淀的浊度判断是否发生反应[6]。LAMP方法具有操作简便、检测快速、灵敏度高并且成本低廉等优点，在疾病诊断、病原检测等领域得到广泛应用[7]。本研究利用该项技术建立了志贺氏菌LAMP快速检测方法。