刘庆堂，职爱民，李青梅，柴书军，赵 东，张 磊，邓瑞广，张改平

(河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室，河南郑州450002)

诺氟沙星(Norfloxacin，NFLX)是第3代氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones，FQNS)重要的一种，具有广谱抗菌作用，主要用于治疗畜禽细菌性疾病和支原体感染，尤其对需氧革兰阴性杆菌的抗菌活性高，而且在体外对多重耐药菌亦具抗菌活性，因此被广泛大量地添加到饲料中，应用于畜禽疾病的治疗和预防。然而，NFLX进入畜禽机体后，在动物体内消除缓慢，半衰期长，形成严重的残留，造成对动物源性食品安全和人类食源性疾病的发生[1-2]，鉴于FQNS的毒副作用，世界各国都对其使用范围和使用对象做出了限定，我国规定其最大残留限量为50μg/L[3]。目前检测NFLX残留的方法多是高效液相质谱(HPLC)和液质联用(HPLC-MS)[4-10]等理化方法，虽然可以精确测定，但存在需要昂贵仪器，样品前处理复杂、繁琐费时、不能现场操作等缺陷，限制了其应用。免疫学分析方法具有灵敏、快速、特异、简便等优点，近年来在兽药、农药残留检测领域已被广泛应用[11-14]。本研究应用NFLX人工抗原免疫BALB/c小鼠，建立分泌抗NFLX MAb的杂交瘤细胞株，为免疫学检测方法的建立和拥有自主知识产权检测产品的开发奠定基础。

1 材料和方法

1.1 试剂与溶液 盐酸诺氟沙星为中国兽医药品监察所产品；BSA和OVA为Pierce产品；完全佐剂(Freund's complete adjuvant,FCA)、不完全佐剂(Freund's incomplete adjuvant,FIA)、细胞培养基RPMI-1640、选择培养基HAT、HT和PEG-1500为GIBCO产品；新生牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品；3，3'，5，5'-四甲基联苯胺(TMB)为Sigma产品；……