裴 磊，王国俊，熊 杰，李雁冰，姜永萍，陈化兰

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)

2005年，我国青海省发生严重的禽流感疫情，造成大量野鸟死亡[1]。此后，禽流感相继在多个国家发生并对人类具有致病力。禽流感病毒(AIV)易于变异，多种动物可充当其生物载体，这给动物和人类的健康带来威胁，因此需要研制出有效的疫苗对其预防。

以 A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(简称 PR8)为内部基因，利用反向遗传操作技术制备的重组疫苗，具有应用广泛、安全性好、抗原成分齐全、诱导有效免疫持续时间长、亚型间交叉免疫保护能力强等特点[2]。A/Bar-headed goose/Qinghai/3/2005(BHGQH/05)H5亚型禽流感野鸟分离株的代表株，属于2型(Clade 2.2)进化支。本研究选择BHGQH/05作为表面基因供体，PR8作为内部基因供体[3-5]，利用反向遗传操作技术制备具有高增殖特性，HA基因多个连续碱性氨基酸缺失的重组弱毒疫苗株，并在BALB/c小鼠体内评价其免疫效力，以期作为人用H5亚型禽流感疫苗的技术储备。

1 材料和方法

1.1 病毒株及内部基因表达质粒 病毒株BHGQH/05和A/Chiken/Vietnam/1180/2006(H5N1)(简称CKVN/06)由本实验室保存；内部基因的转录质粒和聚合酶基因的蛋白表达质粒均来自于PR8病毒株，由美国CDC的Kanta Subbarao博士馈赠。

1.2 鸡胚、细胞与实验动物 10日龄SPF鸡胚由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供；低代次Vero细胞购自中国科学院武汉病毒研究所；4周龄～6周龄雌性BALB/c小鼠购自北京维通利华实验动物有限公司，所有小鼠感染实验均在生物安全三级实验室中进行。……