徐 涛,陈立锋,李方江,范 凌

心室流出道过去一直被认为是血液的输出途径,近年来随着临床电生理的检测和射频消融技术的发展,发现一些过去难以诊断的室颤、早搏、心动过速等心律失常与心室流出道的结构、形态和功能障碍有关。稳心颗粒治疗各种类型的心律失常临床上都取得较好的疗效[1-3],且具有疗效显著、毒性低、不良反应小等特点,但其对心室流出道的影响却少有研究。本研究采用标准玻璃微电极细胞内记录技术,观察了稳心颗粒对异丙肾上腺素(Iso)诱发豚鼠心律失常模型的影响,以探讨其作用于心律失常的机制及靶点。

1 材料与方法

1.1 动物及试剂 豚鼠,雌雄不拘,200 g～350 g,中国医学科学院实验动物研究所提供。家兔,雌雄不拘,2 500 g～3 000 g,河北北方学院动物室提供。稳心颗粒由山东步长制药有限公司出品,批号081002。

1.2 标本制备 豚鼠击颅致昏后迅速开胸取出心脏,置于氧饱和的改良Locke液中。主动脉前庭标本制备参见文献[4]。制好的标本用不锈钢针固定于灌流槽(1.5 cm×2 cm,容积约4 ml)内的硅橡胶上。用氧饱和的改良Locke液进行恒温[(35±1)℃]、恒速(5 ml/min)灌流,标本在灌流液中稳定30 min后开始实验。

1.3 电位引导 玻璃微电极充以饱和KCl电极液后,直流电阻为(10～20)MΩ。引导主动脉前庭自律细胞自发电位,若记录不到,则将刺激电极置于标本远离瓣膜一端的心肌组织上,给予波宽2 ms、1 Hz、两倍阈强度的方波刺激(YC-2型刺激器,成都仪器厂),刺激时间由数秒至数分钟不等,直至诱发出稳定的自发节律,即停止电刺激开始实验。自发慢反应电位经SWF-1 B型微电极放大器(成都仪器厂生产)放大,经RM 6280C多道生理信号采集系统(成都仪器厂生产)输入微机,自动显示电信号,并分析自发慢反应电位的各项参数指标。

1.4 实验过程及分组 家兔分两组,稳心颗粒组(n=8),以每只(4～5)g/kg稀释后灌胃,1次/天,共1周;对照组(n=8),以同等量的生理盐水灌胃,1次/天,共1周。1周后各自局部手术,颈动脉放血,离心取血浆。电生理记录,待自发节律稳定10 min后,开始采集一组正常的自发慢反应电位作对照,然后改用含有100 μ mol/L Iso的药液灌流,制造心律失常模型,记录电位变化,然后再改用100 μ mol/L Iso+家兔血浆灌流,观察不同时间电位的情况。实验分组,药物血浆组:对照组(n=8),Iso模型组(n=8),Iso+药物血浆组(n=8)。对照血浆组:对照组(n=8),Iso模型组(n=8),Iso+对照血浆组(n=8)。

1.5 观测指标 最大舒张电位(maximal diastolic potential,MDP)、动作电位幅度(amplitude of action potential,APA)、O相最大去极速度(maximal rate of depolarization,Vmax)、4相自动去极速度(velocity of diastolic depolarization,VDD)、复极50%和90%时间(50%and 90%of duration of action potential,APD50and APD90)以及自发放电频率(rate of pacemaker firing,RPF)。

2 结 果

稳心颗粒对Iso诱发主动脉前庭心律失常模型的影响:①用100 μ mol/L Iso灌流后主动脉前庭自律细胞出现了心律失常,与对照组比较,RPF和VDD加快(P＜0.01),APA和MDP的绝对值显著增大,Vmax明显加快,APD50和APD90明显缩短(P＜0.01)。②Iso+生理盐水灌胃组血浆灌流10 min,与Iso模型组比较,各项指标无统计学意义。③Iso+稳心颗粒灌胃组血浆灌流10 min,与Iso模型组和Iso+生理盐水灌胃血浆比较,RPF和VDD减慢,APA和MDP的绝对值显著减小,Vmax明显减慢,APD80和APD90明显延长。详见表1。

表1 稳心颗粒对异丙肾上腺素诱发主动脉前庭心律失常模型的影响(±s)

表1 稳心颗粒对异丙肾上腺素诱发主动脉前庭心律失常模型的影响(±s)

组别 VDD(mV/s) RPF(bpm) MDP(mV) Vmax(V/s) APA(mV) APD50(ms) APD90(ms)对照组 24.5±2.8 98.5±6.9 -57.7±7.6 6.0±3.5 62.6±5.8 115.8±7.5 182.7±8.9 Iso模型组 42.3±2.91) 183.5±8.51) -69.2±7.11) 18.4±3.71) 71.5±6.31) 70.5±9.41) 120.3±8.31)Iso+对照血浆组 43.1±3.11) 183.7±9.11) -69.5±7.81) 18.9±3.61) 70.9±7.11) 69.9±9.61)119.6±8.71)Iso+药物血浆组 27.6±3.32)3)99.8±8.62)3)-55.3±8.22)3)7.8±3.42)3)61.1±6.72)3)110.5±8.42)3)175.2±9.42)3)与对照组相比,1)P＜0.01;与Iso模型组相比,2)P＜0.01;与Iso+对照血浆组相比,3)P＜0.01

3 讨 论

稳心颗粒由党参、黄精、三七、琥珀、甘松组成,是中国第一个调节多离子通道的抗心律失常专利中成药,经临床观察可用于治疗各种类型心律失常。

本实验用异丙肾上腺素制造左心室流出道组织心律失常模型,以进一步探讨稳心颗粒抗室性心律失常的作用机制及靶点。用异丙肾上腺素制造了心律失常模型,出现RPF和VDD明显加快,可能与以下因素有关:Iso降低If离子流的阈电位,使之易于兴奋激活,幅值增大;增加钙流(ICa-L和ICa-T),从而加速4期自动除极速率;增加Ik幅值,加快其衰减过程。出现APA增大和Vmax加速,可能与 Iso能增加心肌细胞 L型钙流(Ica-L)有关。出现APD50和APD90缩短,主要是因为Iso增大了复极过程中K+外流。MDP显著增大,可能是由于Iso具有刺激生电性钠泵的作用之故[5]。

随后,用Iso+稳心颗粒灌胃兔血浆灌流后,心律失常模型得到了一定程度的纠正,出现了左心室流出道自发慢反应电位的RPF和VDD减慢,APA和MDP的绝对值显著减小,Vmax明显减慢,APD50和APD90明显延长。推测可能是中药具有明显的多个离子通道靶点作用的特点。现代药理研究发现,稳心颗粒可提高冠状动脉血流量,降低心肌耗氧量,改善心肌缺血及心功能状态[6]。其中,稳心颗粒所含的甘松提取物可减慢钠通道灭活后的恢复过程以及抑制钙通道的激活[7],这可能导致了If和ICa-T的减小;从而减慢4期自动除极速率,使VDD和RPF减慢。甘松中含缬卓酮,缬卓酮具有膜的稳定作用,三七总皂苷也具有膜的抑制作用[6],两者能够延长动作电位时程,使APD50和 APD90明显延长。稳心颗粒可抑制 ICa-L[7],从而使Vmax明显减慢,APA显著减小。MDP的绝对值显著减小,可能是稳心颗粒调节了钾通道和提高Na+-K+-ATPase活性有关。

本实验以离体动物心脏为研究对象,观察了稳心颗粒对异丙肾上腺素诱发豚鼠左心室流出道心律失常模型的影响,发现有很好的治疗作用,认为稳心颗粒能够治疗室性心律失常。心室流出道也可能是其作用靶点之一,其更加详细的机制有待于进一步的研究。

[1]姚向荣.稳心颗粒对急性脑梗死病人心电变化及血液流变学影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2007,8(5):736-737.

[2]于春玲,刘丽霞,胡文艳.步长稳心颗粒治疗心律失常临床观察[J].实用心电学杂志,2005,14(1):53-54.

[3]王侠,文旺秀,吴焕林,等.稳心颗粒治疗缺血性心律失常的临床研究[J].吉林医学,2005,26(6):616-617.

[4]赵兰平,张晓云,王雪芳,等.乙酰胆碱对豚鼠左心室流出道自律细胞电活动的影响[J].河北北方学院学报(医学版),2006,23(5):9-10.

[5]姚泰.人体生理学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2001:1148-1151.

[6]余群,李黔云.步长稳心颗粒治疗心律失常疗效观察[J].中华临床医学研究杂志,2004,10:2913-2914.

[7]唐其柱,黄峥嵘,史锡腾,等.甘松提取物对家兔心室肌细胞钠钙通道的影响[J].中华心血管病杂志,2004,32:267-270.